【摘 要】
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本研究应用阳离子脂质体转染法、显微注射技术，利用携带报告基因(Enhanced Green Fluorescent Protein，EGFP)的鸡囊胚细胞为供体初步建立了转基因鸡模型，为利用转基因鸡作为生物
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本研究应用阳离子脂质体转染法、显微注射技术，利用携带报告基因(Enhanced Green Fluorescent Protein，EGFP)的鸡囊胚细胞为供体初步建立了转基因鸡模型，为利用转基因鸡作为生物反应器建立了一个技术平台。取得研究成果如下： 1．鸡囊胚细胞体外培养时，添加10％的胎牛血清，细胞的贴壁率最高；M199、EMDM两种细胞培养液对细胞贴壁率的影响差异不显著；培养时间为24h时细胞的贴壁率最高；细胞贴壁率最高达60％左右。 2．鸡囊胚细胞体外转染时，贴壁细胞与悬浮细胞转染都可获得60％左右细胞的瞬时表达；脂质体量为4μg，质粒DNA量为3μg时，转染白来航鸡原代囊胚细胞的效率最高。 3．对受体种蛋进行显微注射时，种蛋赤道面开窗的孵化率最高，达26.74％；对开窗种蛋采用四种不同材料封口，其中用蛋壳膜加封口胶进行封口的种蛋孵化率最好，达27.08％；未开窗处理的种蛋与开窗处理的种蛋的孵化率有显著差异(p＜0.05)；开窗处理的种蛋由于破坏了原来的结构，导致孵化率显著降低。其中注射囊胚细胞的种蛋孵化率为28.43％。 4．对转基因鸡的胚胎及一周龄的小鸡进行荧光检测和PCR检测时，观察到弱的绿色荧光，PCR检测也出现了阳性结果。
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