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目的:采用反义寡核苷酸技术研究survivin与白血病细胞分化的关系并探讨其机制,从而为白血病的基因治疗提供重要的实验室依据。方法:1.Survivin蛋白在k562细胞中的表达。实验分两组:k562细胞组、正常对照组(正常人外周血单个核细胞),用免疫组织化学方法(SABC法)检测survivin蛋白表达。2. Survivin反义寡核苷酸对k562细胞形态、功能的影响及机制的探讨。实验分四组:反义组、无义组、脂质体组、空白组,经脂质体介导进行转染, 转染后24、48小时收集细胞进行检测。采用光学显微镜观察细胞的形态变化,透射电镜观察细胞的超微结构,联苯胺染色检测细胞合成血红蛋白的能力,过氧化物酶染色及NBT还原实验检测细胞内酶的活性,流式细胞仪检测细胞表面分子CD33的表达及细胞周期,免疫组织化学方法检测survivin、c-myc蛋白表达。结果: Survivin蛋白在k562细胞中呈现高表达,而在正常人外周血单个核细胞中无表达。转染survivin反义寡核苷酸后k562细胞出现向成熟红系及粒系分化的形态学及超微结构的改变,而无义组、脂质体组、空白组k562细胞形态无明显改变。反义组k562细胞转染后24、48小时联苯胺染色阳性率分别为11.90%、18.20%,均明显高于无义组、脂质体组及空白组(P<0.05);过氧化物酶染色阳性率分别为17.40%、29.40%,<WP=8>均明显高于无义组、脂质体组及空白组(P<0.05);NBT还原实验阳性率分别为7.50% 、12.10%,均明显高于无义组、脂质体组及空白组(P<0.05)。Survivin反义寡核苷酸转染后24、48小时,k562细胞表面分子CD33的平均荧光强度分别为21.43、14.86,与无义组、脂质体组、空白组比较均明显降低(P<0.05)。反义组k562细胞在转染后细胞周期分布发生明显改变,G0/G1期细胞明显增多, G2/M期及S期细胞明显减少,24小时,G0/G1期、G2/M期及S期细胞比例分别为37.28%、16.25%、44.87%;48小时,G0/G1期、G2/M期及S期细胞比例分别为45.42%、10.88%、40.36%,细胞周期进程受到明显阻滞(P<0.05)。反义组k562细胞在转染后24小时survivin及c-myc蛋白表达降低,但与各对照组比较无显著性差异(P>0.05),转染后48小时survivin及c-myc蛋白表达进一步降低,与各对照组比较有显著性差异(P<0.05);survivin蛋白表达与c-myc蛋白表达呈显著正相关(P<0.01)。结论: 1. Survivin在k562细胞中高表达,可作为白血病基因治疗的靶点;2.Survivin与k562细胞的分化有关,反义寡核苷酸能诱导k562细胞向成熟红系及粒系方向分化;3. Survivin反义寡核苷酸能阻滞k562细胞周期进程、下调c-myc表达,从而诱导k562细胞向成熟方向分化。