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目的:探讨JAK2/STAT3抑制剂WP1066抑制胰腺癌细胞PANC-1和PAN02增殖及免疫调节效应,阐述其可能分子机制,为胰腺癌的临床诊疗提供新的理论依据。方法:(1)检测临床病人胰腺癌组织中p-STAT3表达变化情况;(2)CCK-8检测WP1066对细胞增殖的影响;(3)划痕实验及Transwell检测WP1066对细胞迁移及侵袭能力的影响;(4)流式细胞术检测WP1066对细胞凋亡、周期及PAN02细胞表面MHC分子的影响;(5)RT-q PCR和Western blot检测WP1066对细胞凋亡、周期、迁移相关基因及蛋白表达量的影响;(6)Confocal检测WP1066对细胞中Ki 67和p-STAT3表达量的影响;(7)构建C57BL/6小鼠移植瘤模型,动态监测小鼠精神状态、体重及移植瘤体积,荷瘤成功后,将小鼠随机分为实验组和对照组,实验组每两天一次腹腔注射40 mg/Kg WP1066,对照组注射等体积浓度DMSO,药物治疗10次后处死小鼠并获取移植瘤及肝、肾组织用于HE染色,眼球取血法获取荷瘤小鼠外周血检测肝肾功能;(8)流式细胞术检测肿瘤组织中瘤细胞表面MHC分子及PD-L1表达量变化以及移植瘤中浸润的肿瘤相关免疫细胞百分比变化;(9)流式细胞术检测各组小鼠胸腺中TECs细胞亚群数量、ETPs数量及脾脏中T细胞各亚群数量的变化;(10)小鼠淋巴细胞分层液分离小鼠脾脏淋巴细胞,与PAN02细胞共培养48 h,流式细胞术检测CD4~+及CD8~+T淋巴细胞中Ki 67表达量的变化和淋巴细胞分泌IFN-γ,IL-2及TGF-β的变化。结果:(1)临床人胰腺癌样本中p-STAT3相较于正常胰腺组织表达升高(P<0.01);(2)0μM,2.5μM,5.0μM,7.5μM,10μM的WP1066处理PANC-1和PAN02细胞24 h,48 h和72 h后,均能不同程度抑制胰腺癌细胞的增殖,且WP1066的抑制效应在0-10μM范围内呈明显的剂量依赖性(P<0.01);(3)WP1066处理胰腺癌细胞12 h后,细胞划痕相对愈合面积减少,抑制了胰腺癌细胞迁移(P<0.01);WP1066处理胰腺癌细胞48 h后,穿过迁移小室膜的细胞数减少,减弱了胰腺癌细胞侵袭能力(P<0.01);(4)WP1066处理胰腺癌细胞24 h,48 h后,细胞凋亡率均增加,存活细胞减少(P<0.05);WP1066处理PANC-1细胞48 h后,G2/M期细胞增多(P<0.001),阻滞细胞周期于G2/M期;WP1066处理PAN02细胞48 h后,G1/G2期细胞增多(P<0.05),阻滞细胞周期于G1/G2期;(5)WP1066处理胰腺癌细胞48 h后,Mcl-1,Bcl-2,Kras,Cyclin B1,Cyclin D1和Cyclin E1 m RNA表达量较DMSO组均降低,Caspase-3和Bax的表达则升高,移植瘤组织中相关基因表达变化相同(P<0.05);(6)WP1066处理胰腺癌细胞48 h后,JAK2和STAT3总蛋白水平无明显改变,而p-JAK2和p-STAT3表达减少,同时伴随Cyclin A1,Cyclin B1,Cyclin D1,Cyclin E1,Kras,Mcl-1,Bcl-2,MMP-9蛋白表达下降和Caspase-3,Cleaved caspase-3,Bax蛋白表达增加,在移植瘤组织中结果相同(P<0.05);(7)WP1066处理胰腺癌细胞48 h后,Ki 67及p-STAT3表达量均显著下降;(8)WP1066处理PAN02细胞48 h后,细胞表面MHCⅠ和MHCⅡ类分子表达增强(P<0.05);(9)与对照组相比较,WP1066处理移植瘤模型鼠,抑制了移植瘤生长(P<0.001),且药物无明显肝肾毒性;(10)移植瘤组织中瘤细胞表面MHCⅠ和MHCⅡ类分子表达均增加,而PD-L1的表达下降(P<0.05);此外,移植瘤组织中浸润的CD8~+T细胞、NK细胞、NKT细胞百分比增多,而MDSCs和Treg细胞百分比则减少(P<0.05);(11)WP1066诱导胸腺中TECs、c TECs及ETPs数量增加(P<0.05),促进脾脏中CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、CD4~+Naive T细胞、CD8~+Naive T细胞、CD4~+RTEs和CD8~+RTEs数量增加(P<0.05);(12)WP1066使荷移植瘤小鼠脾脏T细胞中Ki 67表达及T细胞分泌的促进肿瘤免疫应答细胞因子IFN-γ,IL-2增加,而抑制肿瘤免疫应答的细胞因子TGF-β分泌减少(P<0.05)。结论:WP1066通过抑制JAK2和STAT3磷酸化,调控下游基因表达变化,阻滞细胞周期进程并诱导细胞凋亡,从而抑制PANC-1和PAN02细胞增殖。同时,通过增强肿瘤免疫原性和胸腺功能、增加抗肿瘤免疫细胞向肿瘤组织浸润及调控T细胞分泌细胞因子,促进细胞免疫应答,发挥抗肿瘤效应。因此,WP1066是一种较有潜力的抗胰腺癌的小分子抑制剂。