籼稻组培障碍的分子遗传分析及无机氮源影响研究

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cnm008
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
水稻(Oryza sativaL.)是我国重要的粮食作物。面对日益频繁的干旱、极端温度等非生物胁迫的影响,以及人口增长和生态环境的压力,传统的水稻育种方法难以满足需求。现代生物技术手段,特别是分子标记辅助选择、转基因技术,在改良水稻品种方面的重要性日渐凸显,大大加快了育种进程。通过转基因技术改良现有主栽品种或杂交亲本,可培育出新的高产、优质、多抗的水稻新品种或杂交组合。尽管粳稻的遗传转化取得了较大成功,但籼稻的遗传转化仍然存在困难。而全球80%的稻米生产来自籼稻。因此研究籼稻和粳稻在组织培养特性上差异的遗传机理,提高籼稻遗传转化效率,具有重要的理论和现实意义。  本研究针对籼稻组织培养特性进行分子遗传学研究,构建具代表性的遗传群体,通过对愈伤组织诱导率,愈伤组织继代能力,以及愈伤组织分化能力等性状的研究,初步定位相关性状的QTLs位点,并用生物信息学方法加以验证。全面研究亚硝酸还原酶和无机氮源对籼稻转化的影响,同时针对影响籼稻转化率的一些关键环节和因素进行系统优化,初步建立适合93-11(重要的籼稻骨干亲本)的农杆菌介导转化体系。具体结果如下:  (1)以籼稻93-11为母本,粳稻日本晴为父本,构建了含190个株系的重组自交系群体。使用202个遗传标记,通过复合区间作图,检测了与水稻成熟胚组织培养特性相关的QTLs。使用6个指标来评价成熟胚组织培养特性,分别为胚性愈伤诱导率、愈伤继代能力、分化率、平均分化苗数、绿苗分化率和平均分化绿苗数。日本晴的组织培养特性好于93-11,除愈伤继代能力外的指标外,其余指标均优于93-11。共检测到21个有关QTLs,定位到水稻的8个染色体上。其中4个QTLs与胚性愈伤诱导率有关,5个QTLs与愈伤组织继代能力有关,3个QTLs与分化率有关,2个QTLs与平均分化苗数有关,4个QTLs与绿苗分化率有关,3个QTLs与平均分化绿苗数有关。  (2)以检测到的21个QTLs所在的标记区间为候选的染色体区间,通过分析基因芯片的数据,寻找位于候选区间内,93-11相对日本晴显著下调和上调表达的基因。初步筛选到17个下调表达基因,并对其中16个进行了real-time PCR分析鉴定,扩增结果较好的有14个。其中8个在93-11中未检测到表达,LOC_Os04958060下调表达2倍,其余5个基因在93-11中显著下调表达均在4倍以上。初步筛选到7个候选的上调表达的基因,经过real-time PCR分析鉴定,其中2个基因在日本晴中未检测到表达,4个基因在93-11中显著上调表达,其中LOC_Os01965000.1编码产物为铵转运蛋白。通过real-time PCR了分析其他与氮代谢有关的基因,在93-11和日本晴中的表达水平。发现与氨同化有关的OsGS1;1,OsGS2和OsNADH-GOGA T2表现为上调表达,与硝酸盐和铵盐的转运有关的OsNR T1;1和OsAMT3;2也表现为上调表达。  (3)不同水稻品种亚硝酸还原酶NiR的酶活与表达量存在差异,93-11的酶活低,但表达量高;而日本晴的酶活高,但表达量低。比较两品种NiR的氨基酸序列,发现有两个位点的差异。构建日本晴和93-11的NiR的超表达载体和RNAi干扰载体,对93-11和日本晴的愈伤组织进行转化实验表明,超表达NiR能显著提高93-11的抗性愈伤组织比例,但对分化影响很小;而RNAi干扰NiR表达,降低了两个品种的抗性愈伤组织比例和分化效率。  (4)氮源的种类、配比和浓度对93-11愈伤组织的诱导和分化的影响均较大,在单一使用硝态氮或铵态氮条件下,都不能诱导出胚性愈伤组织;适合93-11的[NO3-]/[NH4+]为20 mM/20 mM,而适合日本晴的[NO3-]/[NH4+]为40 mM/10mM。  (5)比较了不同粳稻和籼稻品种的组织培养特性,针对籼稻93-11组织培养特性欠佳的问题,进行了系统的技术优化。结果表明:使用较高浓度的维生素、较大的组织培养空间以及添加乙烯抑制剂(30μM氯化钴)都能改善93-11的组织培养表现;1 mg/L KT+1 mg/L NAA+0.01 mg/L TDZ的激素配比可使93-11的愈伤组织分化率提高到33.29%;较早去除分化培养基中的潮霉素,可以促进愈伤组织的分化。  本研究为解释籼稻和粳稻在组织培养特性上差异的遗传机理,提供了有用信息;并对提高农杆菌介导的籼稻转化率,提供了新的思路;为培育具有良好组织培养特性的籼稻品种和杂交组合,建立了方法学和材料基础。  
其他文献
随着工业机器人、数控机床以及计算机辅助制造等技术的快速发展,为适应测量、伺服系统数字化的要求,出现了以实现自整角机控制系统信号之间相互转换为目的的特殊模数转换器。如自整角机--数字转换器(SDC),旋转变压器--数字转换器(RDC)和它们的逆转换器。这些转换器具有精度高、可靠性好、无旋转运动、不需调整等优点,是计算机与控制系统之间理想的接口电路,应用于火控系统中的目标跟踪、高炮或发射架伺服系统及其
IFN-α已广泛应用于治疗慢性粒细胞性白血病(CML)患者,但是IFN-α抗白血病的确切机理尚不清楚.t(9;2)(q34.1;911.21)易位形成的费城(Ph)染色体是CML细胞遗传学方面的一个特征
红外传感和探测是一种被广泛应用的关键性技术,它是整个红外技术的核心,有着广泛的应用前景。不仅应用在侦察、夜视等军用领域,而且逐渐扩展到工业检测、医疗卫生等民用领域,具有
组蛋白变体与常规组蛋白相比分布于特定的区域并行使自己独特的功能。组蛋白H2A.Z是被研究较为深入的组蛋白变体之一,它主要富集于基因转录起始位点(TSS)。Swr1复合物以及其在
在SoC(System On Chip)片上系统设计中,IP的复用以及系统的验证是SoC系统设计的关键,IP复用的最终理想,是实现IP的即插即用,这样不仅使IP的利用最大化而且可以加速SoC系统的
研究背景动脉粥样硬化发生发展与心脑血管疾病的发生密切相关。我们在前期研究中发现内皮细胞中高表达的micro RNA-221/222能通过抑制转录因子ETS-1的表达进而减轻Ang II诱导
实现以学生为中心,以教师为主导的教学理念即是新课程的要求,也是目前的教学思想。但就目前的发展趋势来看,我国初中语文教师还是采用传统的教学观念及教学方式,完全弱化了学生的
单脉冲有源相控天线阵是单脉冲雷达测角的关键技术。本文结合实际工程,对采用水平极化方式的三角形栅格相控天线阵进行分析,且分别制作了一行线阵天线样品和一块不含辐射单元
FFT(快速傅立叶变换)在数字信号处理中占据着很重要的地位。例如频谱分析、FIR数字滤波器的实现、系统的分析和设计,以及数据压缩等方面都会用到FFT算法。正因为FFT算法使用
在社会高速发展的今天,人们对于信息的获取显得尤为重要。人们获取的信息绝大部分来自于视觉,所以各种形式的显示技术就得到了快速的发展。微显示技术和大屏幕投影技术一样,近年