研究目的：
　　近年来，不孕不育治疗和辅助生殖方式虽然取得了显著进展，但至今尚未出现有效的方法来治疗子宫结构或功能完全丧失的女性患者。对于这样的患者，只有通过妊娠代孕或子宫移植的方式才有可能成为母亲。然而，许多伦理、社会、技术和安全方面的挑战往往会随之而来。迄今为止，子宫的器官移植已进入临床用来治疗先天性的子宫功能丧失或一些不可逆的子宫损伤。然而，临床供体不足、移植后免疫排斥、术后费用高等潜在问题依然限制了全子宫同种移植的应用。一种理论上的替代方法是利用组织工程材料构建人工子宫，这对材料的结构、性能和组成成分有一定的要求。近二十年来，组织工程技术，特别是组织去细胞技术的快速发展为器官的异种移植带来了新的思路，极大程度上减少了移植后的免疫排斥反应。在本研究中，制备了兔子宫去细胞支架（dUECM），并用生物交联剂京尼平（GP）和原花青素（PC）分别对其进行交联改性，之后原位移植到环切子宫的大鼠子宫缺损模型中促进子宫的再生修复，并以化学交联剂戊二醛（GA）作为对照。在大鼠子宫缺损模型中，生物交联剂交联改性的子宫去细胞支架在移植后展现了更好的促进子宫再生修复的效果。兔子宫去细胞支架通过降解产生的细胞外基质成分与组织周围环境中的各种细胞相互作用，促进组织再生，最终实现大鼠子宫结构和功能的重建。这一初步探究实现了跨物种子宫去细胞支架移植的新尝试，为今后将动物子宫去细胞支架应用于临床提供了新思路。
　　研究方法：
　　1.以兔作为异种子宫去细胞支架的来源动物，制备兔子宫去细胞支架（dUECM）。通过H&E染色、扫描电镜观察、DNA残余含量检测等方法，评价兔dUECM的去细胞程度。通过Masson染色、免疫组化染色以及Elisa法检测兔dUECM的细胞外基质成分（纤连蛋白、胶原蛋白、层黏连蛋白等）。
　　2.在兔子宫去细胞支架的基础上，通过生物交联法，制备改性兔子宫去细胞支架。通过体内外抗酶解实验、机械性能检测等，优化交联改性兔子宫去细胞支架的制备工艺，保证其充分发挥促进各类细胞黏附、生长的作用。
　　3.通过细胞实验，对改性兔子宫去细胞支架的安全性进行评价。还通过大鼠背部皮下埋植实验，观察炎症反应，验证其生物相容性。通过综合比较，确定生物交联剂交联改性有利于缓解子宫去细胞支架降解速度和炎症反应。
　　4制备大鼠子宫缺损模型动物，原位移植改性子宫去细胞支架。通过H&E、Masson和免疫组化等方法评价移植部位子宫再生的情况，观察移植后子宫内膜上皮细胞增殖以及子宫粘膜上皮再生情况，结合移植部位免疫反应情况，在体全面评价交联改性子宫去细胞支架原位异种移植对促进受体子宫再生和功能重建的效果。
　　研究结果：
　　1.通过物理/化学法成功制备了三维结构完整、无细胞成分残余的兔子宫去细胞支架，并且极大程度的保留了细胞外基质成分包括纤连蛋白、胶原蛋白等。
　　2.通过戊二醛（GA）、原花青素（PC）、京尼平（GP）不同交联剂的交联改性，分别制备得GA-dUECM、PC-dUECM、GP-dUECM；随着交联浓度的增加，支架机械性能改善越明显，抗酶解能力越强。
　　3.和GA相比，另外两种生物交联剂展现了更优越的细胞安全性，在0.1%PC（PC-M）和0.625%GP（GP-M）时有较明显的促细胞生长的作用；在皮下埋植实验结果表明相比化学交联剂，生物交联剂能减少炎症细胞的浸润，适宜浓度的交联不仅能提高抗降解性能，还能促进正常细胞的浸润。
　　4.在移植术后30天，未交联的dUECM完全降解，大鼠子宫仅靠外粘膜粘连连接；90d后，PC-M组再生效果最好，但仍保留少量支架，移植部位子宫组织再生明显，免疫排斥反应最轻；GP-M也展现了与PC-M较为相似的结果。
　　研究结论：
　　本研究的最终目的是建立交联改性兔子宫去细胞支架用于异种移植，实现大鼠子宫的再生和重建。比较了交联改性对子宫去细胞支架的体内外特性的影响，证明交联处理对子宫基质的微观结构没有显著影响。与GA交联组相比，PC和GP交联组在异种模型中表现出良好的细胞相容性和最小的宿主免疫反应。总的来说，交联在体内外都能提高机械性能和抗酶解活性，但交联剂类型和交联度的影响不同。在所有测试的交联组中，中等浓度PC交联后的dUECM具有与天然子宫相似的力学性能、合适的酶降解率，展现了良好的生物相容性、较低的异种宿主免疫排斥、以及异种移植后最佳的子宫再生和重建的结果。由此可见，合适交联剂及其浓度的选择，是维持去细胞支架降解速度和组织再生速度达到平衡，最终达到子宫完美再生的关键因素。因此，改性子宫去细胞支架有望成为实现子宫异种移植的新材料。