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第一部分NUCB2基因敲除对大鼠肝糖代谢的影响与机制研究目的:探讨NUCB2基因敲除对高脂喂养大鼠肝糖代谢的影响,并初步研究NUCB2对肝糖代谢的影响机制。方法:将由杂合子与杂合子繁殖的同窝6周龄野生型（WT）与纯合子(NUCB2-/-)健康雄性大鼠,分别进行普食（ND）和高脂（HFD）喂养,即分为ND-WT、ND-NUCB2-/-、HFD-WT、HFD-NUCB2-/-四组,喂养12周并每周测定体重,12周后分别测定肛温、摄食、空腹与餐后血糖,并进行GTT、ITT和高胰岛素正葡萄糖钳夹实验,分析NUCB2基因敲除对大鼠肝糖代谢的影响。将四组大鼠的肝组织进行转录组测序分析,分析NUCB2基因敲除对糖代谢相关因子的影响,对产生表达变化的因子进行进一步的Q-PCR和Western blot以证实其检测结果。再检测各组大鼠肝组织mRNA与蛋白表达水平,进行Q-PCR和Western blot实验,分析糖异生相关因子（PEPCK、G6Pase）、糖酵解相关因子（Gck、PKLR）、糖原合成相关因子（GSK3β）的表达变化情况,检测糖代谢信号通路IR/IRS/AKT的表达差异。结果:在分组喂养12周后,HFD组NUCB2-/-大鼠的体重、摄食量较WT增加,肛温则降低（P<0.05或P<0.01）;FBG、PBG、GTT、ITT与高胰岛素正葡萄糖钳夹实验结果均显示NUCB2基因敲除组较对照组胰岛素抵抗增加（P<0.05或P<0.01）;肝组织的转录组测序分析显示NUCB2基因敲除大鼠较对照组的糖有氧氧化相关基因PDK4表达增加;NUCB2基因敲除大鼠较对照组肝糖异生相关因子PEPCK、G6Pase表达增加,糖酵解相关因子Gck、PKLR与糖原合成相关因子GSK3β表达降低,IR/IRS/AKT信号通路的磷酸化水平降低。结论:NUCB2基因敲除可增加大鼠高脂诱导的胰岛素抵抗。第二部分NUCB2对肝细胞糖代谢的影响与机制研究目的:探讨NUCB2对大鼠原代肝细胞糖代谢的影响与机制。方法:用游离脂肪酸（FFAs）对NUCB2-/-和野生型大鼠原代肝细胞进行诱导,造成肝细胞胰岛素抵抗模型。利用海马XF糖酵解速率分析（Glycolytic Rate Assay,GRA）分析NUCB2-/-和WT大鼠原代肝细胞在糖酵解上的差异,通过细胞线粒体压力测试（Cell Mito Stress Test,MST）分析各组细胞有氧氧化能力的不同。再检测各组原代肝细胞m RNA与蛋白表达,进一步分析NUCB2-/-和对照组之间PDK4、PEPCK、G6Pase、Gck、PKLR、p-GSK3β等的表达差异,验证NUCB2在肝细胞中对IR/IRS/AKT的表达活性影响。结果:在NUCB2-/-和WT大鼠原代肝细胞成功诱导胰岛素抵抗模型。在海马XF细胞线粒体压力测试（Cell Mito Stress Test,MST）和糖酵解速率分析（Glycolytic Rate Assay,GRA）实验中发现NUCB2-/-原代肝细胞较对照组的有氧氧化能力与糖酵解均降低（p<0.05或p<0.01）。在进一步的m RNA与蛋白表达检测中,NUCB2-/-大鼠原代肝细胞较对照组PEPCK、G6Pase、PDK4表达增加,Gck、PKLR、p-GSK3β表达降低,IR/IRS/AKT信号通路的磷酸化水平降低。结论:NUCB2基因敲除可降低肝细胞有氧氧化与糖酵解能力,增加肝细胞FFAs诱导的胰岛素抵抗。