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Ⅰ型鸭病毒性肝炎（duck viral hepatitis,DVH-Ⅰ）是由Ⅰ型鸭肝炎病毒（duckhepatitis virus,DHV-Ⅰ）引起的雏鸭一种高度致死性和传播性传染病,以肝炎为其主要特征。DHV-Ⅰ结构蛋白由VP1、VP3、VP0构成,其中VP1蛋白大部分暴露于病毒粒子表面,含有T细胞和B细胞抗原表位。本研究运用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达了DHV-Ⅰ结构蛋白VP1。根据DHV-Ⅰ基因组序列设计并合成一对特异性引物,通过RT-PCR方法扩增DHV-Ⅰ（A66株）VP1基因。用限制性内切酶EcoRⅠ/HindⅢ消化VP1基因和转移载体pFastbacⅠ,在T4 DNA连接酶作用下将二者连接构建转移质粒pFastbac-VP1。经PCR、双酶切及测序鉴定后将其转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10bac中,蓝白斑筛选获得重组杆状病毒穿梭质粒rBacmid-VP1,在脂质体的介导下转染昆虫细胞Sf9,获得重组杆状病毒rvBac-VP1。SDS-PAGE分析表明,VP1基因在昆虫细胞中获得表达,表达产物分子量约为27KDa。Western-blot检测表明,表达产物能与DHV-Ⅰ阳性血清发生反应,具有良好的免疫反应原性。本研究成功的构建了真核表达质粒pcDNA-VP1。参照DHV-Ⅰ（A66株）全基因组序列设计一对特异性引物,运用RT-PCR方法扩增VP1基因。在限制性内切酶HindⅢ/EcoRⅠ作用下,分别双酶切纯化的VP1基因和真核表达载体pcDNA3.1（+）,经T4 DNA连接酶连接后转化DH5αE.coli感受态细胞,提取质粒经PCR、双酶切鉴定为阳性后进行序列测定。鉴定的重组质粒命名为pcDNA-VP1,大量提取质粒并进行纯化。纯化的质粒免疫小鼠,100μg/只,共免疫三次。采用间接ELISA方法检测免疫小鼠血清中特异性抗体水平,结果显示小鼠免疫后21天抗体水平上升,第5周后达到高峰,并维持在此水平。而对照组与空质粒免疫组未检测到特异性抗体,表明构建的真核质粒能诱导小鼠产生体液免疫。