嗜水气单胞（Aeromonas hydrophila）是人和多种动物的病原菌，其外膜蛋白（outermembrane protein，OMP）具有良好的免疫原性。嗜热四膜虫（Tetrahymena thermophila）是一种营自生的非致病性纤毛虫，许多研究表明其可作为一个理想的异种表达载体。　　 按照真核细胞四膜虫的基因密码子偏好，优化外膜蛋白 A（OmpA）基因密码子，并化学合成一段抗原性较强的基因片断，将其克隆至pUC18-T载体，经测序确定合成正确。设计一对引物在两端分别加上EcoR I、XhoI酶切位点，扩增ompA基因，定向克隆至表达质粒pET32a（+）中，重组质粒经限制性酶切鉴定后测序。结果表明插入片段长度为219 bp，与合成的序列相比，同源性为99％。将重组原核表达质粒pET32a-ompA转化至大肠杆菌BL21，经诱导可表达分子量约30 KD的重组蛋白，用兔抗J-1株总外膜蛋白的血清进行Western blot，在30 KD处有明显反应条带，说明所表达的优化OmpA保持原有外膜蛋白的反应原性。　　 根据 neo基因的序列和化学合成的ompd基因序列设计两对引物，调整引物中起始密码子ATG和终止密码子TGA附近的结构，分别获取neo基因和ompd部分基因片断，再通过重叠延伸的方法，将两个基因通过一疏水性柔性多肽接头（Gly4Ser）3碱基序列进行前后拼接，构建新的neo-linker-ompA融合基因。利用嗜热四膜虫金属硫蛋白MTT基因作为启动子，构建了一个适于嗜热四膜虫的基因打靶载体。该载体利用MTT基因的5’侧翼区作为同源臂，中间嵌入neo-linker-ompA融合基因编码区，从而形成了一个表达盒。序列分析表明neo、ompA及接头拼接组合的顺序、方向及序列完全正确。质粒的正确构建为下一步在四膜虫中表达奠定基础，该载体既满足在四膜虫体内表达外源蛋白的需要，又具有靶向性，因此具有很强的操作性。　　 在分别绘制嗜水气单胞菌J-1株和嗜热四膜虫BF-1株生长曲线的基础上，选择合适的感染比，探讨二者之间的相互作用关系。根据生长曲线，嗜水气单胞菌在4h后进入对数生长期，12 h左右进入稳定期，16-17 h达到最高；嗜热四膜虫的生长曲线表明，其适宜接种的初始密度为5×103细胞/mL，对数期10-44 h，稳定期44-50 h；将对数生长期和稳定期的细菌和四膜虫按照10:1，50:1，100:1的感染比混合，发现处于对数生长期的细菌全部被虫体缓慢消化，稳定期的嗜水气单胞菌以100:1感染比感染虫体时，可在虫体内增殖，出现S型增殖曲线。透射电镜显示嗜热四膜虫BF1株可吞噬嗜水气单胞菌J-1株，并一定条件下在虫体内定殖；扫描电镜下可见嗜水气单胞菌J-1株作用于虫体后，虫体胀大，沟回变浅，纤毛脱落。本试验为进一步探讨以四膜虫作为模型宿主，来研究嗜水气单胞菌的毒力奠定了基础。