目的近年来认为乳腺癌是全身性疾病,治疗已经从局部治疗转变为以手术为基础的综合性治疗,新辅助化疗(NAC)已经成为局部晚期乳腺癌的标准治疗。NAC即术前化疗,可以降低肿瘤的临床分期,为乳腺癌患者争取保乳手术的机会,并且可以通过疗效的评价来测试肿瘤对于化疗方案的敏感性,从而为术后的进一步治疗提供指导。乳腺癌是激素依赖性肿瘤,受雌激素和孕激素调控,多数乳腺癌组织均有其受体(ER,PR)表达,且相当一部分乳腺癌组织中存在原癌基因HER-2表达。对于ER,PR,HER-2及p53的表达与NAC疗效之间的相关性一直存在争论。虽然紫杉类药物已经成为治疗乳腺癌的基础性药物,以及赫赛汀等靶向治疗药物应用于临床,但在我国,葸环类药物作为治疗乳腺癌的一线药物的地位不容动摇。本研究通过回顾性分析对乳腺癌雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、人类表皮生长因子受体-2(HER2)及p53蛋白的表达与葸环类药物NAC疗效之间的相关性进行探讨,为临床治疗提供指导。材料与方法一、材料1、临床资料选择中国医科大学附属第一医院2006年1月～2008年6月的初治乳腺癌患者40例,均为女性,年龄25～70岁,中位年龄50.4岁,≤50岁者25例,＞50岁者15例;绝经前27例,绝经后13例;Ⅱ期7例,Ⅲ期33例;浸润性导管癌39例,浸润性小叶癌1例。经系统检查均未发现有远处转移。化疗前均经粗针穿刺活检确诊为乳腺癌。术前临床分期依据国际抗癌联盟(UICC)标准。2、NAC方案采用CEF方案者37例,CE方案者3例。CEF方案:表阿霉素(EPI)70 mg/m2、5-氟尿嘧啶(5-FU)600 mg/m2、环磷酰胺(CTX 600 mg/m2)静滴,第1天;CE方案:EPI 70 mg/m2、CTX 600 mg/m2。21 d为一个周期。预定NAC 3～4周期。实际完成2个周期者30例,3个周期者4例,≥4个周期者6例。3、疗效评定方法NAC前后采用乳腺彩超、乳腺X线摄片分别测量肿瘤最大径及垂直径,33例患者NAC前后以彩超测量值进行对比,7例患者NAC前后以乳腺X线摄片测量值进行对比。疗效按WHO制定的统一标准分为:完全缓解(CR):可见的病变完全消失,包括腋窝淋巴结;部分缓解(PR):肿块缩小50%以上;稳定(SD):肿块缩小不及50%或增大未超过25%;进展(PD):一个或多个病变增大25%以上或出现新病变。其中CR又分为病理完全缓解(pCR)和临床完全缓解(cCR)。手术后再根据病理结果评价疗效。以CR+PR为有效,SD+PD为无效。二、方法1、免疫组化SP法检测穿刺标本经甲醛固定,石蜡包埋,4μm厚切片,按常规免疫组化SP法作ER、PR、c-erbB2及p53检测。ER、PR及p53阳性反应物为棕黄色颗粒,定位于病变细胞的细胞核,将染色后阳性细胞＞10%的定为受体阳性,≤10%的定为受体阴性;而c-erbB2定位于细胞膜,判定标准如下:没有染色或少于30%肿瘤细胞染色为阴性(-),＞30%的肿瘤细胞有不完整细胞膜着色为弱阳性(+),＞30%的肿瘤细胞有较弱但完整的细胞膜着色为阳性(++),＞30%的肿瘤细胞较强完整细胞膜着色为强阳性(+++)。本研究把免疫组化法结果为(-)和(+)者看作HER-2基因无扩增,(++)及(+++)者进一步行FISH检测。鼠抗人ER、PR、p53、c-erbB2单抗及免疫组化SP试剂盒均购白福建迈新生物技术有限公司。2、FISH检测HER-2基因的扩增水平切片常规二甲苯脱蜡、梯度乙醇水化,酸性亚硫酸钠处理,蛋白酶消化,HCl浸泡,梯度乙醇脱水,丙酮固定,56℃烤片,加10μl探针工作液于组织切片上,73℃变性5 min后于原位杂交仪中杂交,42℃湿盒杂交过夜(16 h),50%甲酰胺、柠檬酸缓冲液、0.1%NP-40和70%乙醇漂洗,暗处自然干燥玻片,DAPI复染,封片。暗处放置20 min后在荧光显微镜下观察。结果判定标准:计数30个细胞,统计Ratio值(Ratio值=30个细胞核中红信号总数/30个细胞核中绿信号总数)。Ratio＜1.8为阴性结果,提示该样本无HER-2基因扩增;Ratio＞2.2为阳性结果,提示样本中HER-2基因发生扩增;Ratio在1.8～2.2时,选择增加计数细胞至100个,或重做FISH试验来判断最终结果。HER-2 FISHTM检测试剂盒(美国VYSIS公司)购自北京金菩嘉生物技术有限公司。结果在NAC结束后根据按WHO制定的统一标准评估所有患者的临床反应性。40例患者中,达到CR者4例(10%),其中pCR者1例;PR者26例(65%);SD者9例(22.5%);PD者1例(2.5%)。HER-2基因无扩增及p53表达阴性均与高反应性相关(P均＜0.05)。化疗＜4个周期患者CR占5.88%,≥4个周期的患者CR占33.33%,二者比较有统计学差异(P＜0.05)。本组获得CR者均为化疗3个周期以上者。结论在以蒽环类为基础的NAC组中,HER-2基因无扩增p53蛋白阴性表达均是临床反应性高的预测因子。适当增加化疗周期数可能增加完全缓解率。