目的：本实验在前期体内研究的基础上，进一步在体外研究缝隙连接在脑血管痉挛中的作用。首先建立OxyHb诱导的脑血管痉挛细胞模型，并检测模型中细胞缝隙连接蛋白表达的改变；再应用RNA干扰技术，特异阻断兔脑血管平滑肌细胞Cx43基因，观察其对OxyHb诱导的脑血管平滑肌细胞细胞持续收缩的影响。通过上述研究为开展脑血管痉挛的基因治疗奠定基础。 材料与方法：一、兔基底动脉平滑肌细胞的原代培养与鉴定：开颅取兔脑基底动脉，去除结缔组织和内膜，中膜应用组织贴块法培养平滑肌细胞，用光学相差显微镜、免疫细胞化学染色鉴定。二、脑血管痉挛细胞模型的建立：平滑肌细胞加入10^-6M OxyHb孵育24h、48h、72h建立脑血管痉挛不同时段的细胞模型，应用电镜测定平滑肌细胞的长度。三、测定脑血管痉挛细胞模型不同时段缝隙连接蛋白表达的改变：平滑肌细胞加入10^-6M OxyHb孵育24h、48h、72h后，提取总RNA行半定量RT-PCR分析，以正常组兔基底动脉平滑肌细胞中缝隙连接蛋白mRNA平均相对含量作正常对照，β-actin引物为扩增时提供内参对照，扩增产物凝胶电泳，对电泳结果进行图像分析，以目的产物和β-actin产物条带灰度值之比作为该种蛋白mRNA在血管组织中的相对含量，记录结果，均数±标准差，采用t检验，进行统计分析。四、设计并化学合成针对兔Cx43基因的特异性siRNA：按照Elbashir SM，Tuschl T RNAi的siRNA序列选择原则，设计并化学合成针对兔缝隙连接蛋白Cx43基因的特异性siRNA 3对及非特异性siRNA 1对。五、脂质体转染平滑肌细胞并筛选siRNA：脂质体siPORT NeoFX转染不同siRNA，应用半定量RT-PCR和MTT法检测转染24h、48h、72h后不同浓度siRNA对细胞Cx43 mRNA表达和细胞增殖率的影响，筛选抑制效应最好的siRNA及作用浓度。六、脂质体转染siRNA对平滑肌细胞GJIC功能的影响：脂质体siPORT NeoFX转染筛选的siRNA及其浓度，染料传输实验检测siRNA对细胞间缝隙连接介导的通