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目的:探讨热休克联合OK-432对人外周血单个核细胞(PBMC)来源的树突状细胞(DC)体外培养的影响,和对DC诱导自身淋巴细胞抗肿瘤效果的影响。
方法::体外用胰腺癌细胞株(Pane-1)裂解产物致敏的DC,在37,38,39,40℃热休克124,时后加入体外促成熟剂OK-432。分为OK-HS-TL-DC,OK-TL-DC,HS-TL-DC。TL-DC,DC细胞组,分别与自身淋巴细胞共培养。光镜下观察细胞形态,ELISA法检测DC上清IL-12和和TNF-α的表达情况,流式细胞仪检测培养前后各组细胞表面抗原CD11 C,CD80,CD83,CD86,HLA-DR,TLR-4的表达情况,Western blotting和免疫荧光检测不同时间和温度HSP-70的表达量,活细胞计数(Cell Counting Kit-8.CCK-8)法检测不同处理组刺激自身淋巴细胞对两种胰腺癌细胞株PANC-1,Pare8988和胃癌细胞株SGC7901的杀伤率。
结果:DC体外诱导成功,热休克联合OK-432可使DC成熟,镜下可见典型的DC形态。流式检测HLA-DR,CD80,CD86和TLR-4的表达分别为95.1%,79.5%,80.3%,92.1%,上清中IL-12和TNF-α的含量OK-HS-TL-DC组显著高于DC对照组(P<0.01)。热休克后免疫荧光和Western blotting检测DC表达HSP70较前表达升高,呈时间依赖性和温度依赖性。热休克联合OK-432修饰Panc-1致敏的DC激活自身淋巴细胞,CCK-8法检测其对Panc-1的杀伤率为72.73%,对Patu8988杀伤较弱,对SGC7901几乎没有杀伤。不同处理组的杀伤率OK-432一HS-TL-DC>OK-432-TL-DC>HS-TL-DC>TL-DC>DC,且与OK-432呈剂量依赖效应。
结论:热休克联合OK-432修饰Panc-1裂解物致敏的DC生物活性增强,经其刺激的自身淋巴细胞可产生高效特异的抗肿瘤免疫效应。