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猪轮状病毒(Porcine Rotavirus,PRV)属于呼肠孤病毒科、轮状病毒属,它作为腹泻的主要病原在世界范围内广泛流行,是引起仔猪病毒性腹泻的主要病原之一。该病幼畜最为易感,1～4周龄仔猪发病率超过80%,死亡率7～20%,且症状严重,主要表现为严重腹泻,部分病例因严重脱水、酸碱平衡失调、继发感染而死亡。鉴于其危害严重且没有有效治疗手段,所以对于轮状病毒的提前诊断预防尤其重要。在轮状病毒的检测技术中,实时荧光定量PCR(real time fluorescent quantitative PCR,real time FQ-PCR)大多都以SYBR GreenⅠ染料提供荧光信号,能够有效解决常规PCR的污染问题,特异性更强,自动化程度更高,可满足对多种样本检测的需要,已经得到广泛的认可。本次实验先从甘肃某猪场发生腹泻的猪群中采集粪便样品,用恒河猴胚肾细胞(MA-104细胞系)培养,并扩增了PRV,再根据Genebank上已提交的多株猪轮状病毒VP6基因编码序列,利用primers premier 5.0软件设计引物。对采集的样品进行处理及病毒RNA抽提,以Oligo(dT)18为反转录的引物,将RNA反转录为cDNA,进而以设计的一对引物及合适的条件进行PCR扩增,目的是建立一种快速、准确、特异的PRV real time FQ-PCR检测方法。本实验对细胞、病毒做了扩增培养,成功提取出病毒RNA并将其反转录成cDNA,扩增出长1100bp左右的基因片段,初步建立了荧光定量检测方法,根据最后得到荧光定量PCR图,看出阴性样品与空白对照的荧光曲线均为直线,而阳性样品荧光曲线则有很明显的上升,且曲线上升高低与模板浓度呈正比,且可初见“S”型曲线。本次试验为今后进行PRV分子流行病学研究、分子诊断试剂的开发以及基因工程疫苗的研制提供了一些理论依据和物质基础。