结直肠癌在全球的发病率和病死率处于上升趋势，根治性手术切除是结直肠癌的主要治疗手法，但对于晚期无手术机会或者术后复发转移的患者，联合化疗是主要的姑息治疗方法，近年来奥沙利铂为基础的辅助化疗有效地改善结直肠癌患者的预后，已经取得显著的疗效。然而，由于耐药的发生,常常导致结直肠癌化疗的失败,并限制了铂类药物的广泛应用。有研究显示FA通路可能参与了肿瘤细胞对交联剂如铂类、丝裂霉素C等化疗药物的耐药。　　研究目的：　　1．探讨在结直肠癌SW480细胞中RAD18蛋白是否也能够调节FA信号通路关键蛋白FANCD2的核内聚集形成从而调节FA信号通路。　　2．探讨FA信号通路的完整性对结直肠癌细胞对化疗药物敏感性的影响。　　方法：　　1．RAD18特异性siRNA转染SW480细胞；　　2．用实时荧光定量PCR/细胞免疫荧光验证转染效率；　　3．干扰组及阴性对照组经丝裂霉素C处理后，通过细胞间接免疫荧光检测细胞FANCD2在核内聚集形成；　　4．CCK8法检测SW480细胞对丝裂霉素C的敏感性。　　结果：　　1．验证siRNA-RAD18的干扰效果　　①带荧光的阴性对照转染细胞24h后，带红色荧光的细胞比例达80％以上，且荧光强度较强(图1)，提示转染效率较高。　　②SW480细胞转染siRNA24h后，行RT-qPCR检测沉默效果，可见siRNA-RAD18组mRNA表达水平与阴性对照组及空白对照组比较有明显降低，能够达到80%以上的干扰效率，差异有统计学意义(P<0.05)。阴性对照组转染后无明显变化。可见成功构建瞬时转染RAD18小干扰RNA的结直肠癌SW480细胞。　　2．RAD18对FA通路中关键蛋白FANCD2在细胞核中聚集形成的影响　　最近研究显示，细胞DNA损伤时 FANCD2在细胞核内聚集从而修复DNA，本实验细胞间接免疫荧光显示，阴性对照组中许多细胞形成明显可见的FANCD2聚集区，并且随着丝裂霉素处理的时间延长而更明显。而siRNA-RAD18组聚集区明显减少。　　3．RAD18基因沉默增加了结直肠癌细胞SW480对丝裂霉素C化疗药的敏感性　　CCK8法检测显示，转染siRNA-RAD18后，SW480细胞对不同浓度的丝裂霉素C敏感性均提高。随着药物浓度的增加，丝裂霉素C对SW480细胞抑制率也增加，呈现出剂量依赖性， siRNA-RAD18组细胞对不同浓度丝裂霉素 C敏感性显著高于阴性对照组及空白对照组（p<0.05）。　　结论：　　1．在结直肠癌细胞中RAD18对FANCD2具有同样的调节作用，它可能通过影响FANCD2的核内聚集形成而调节着FA信号通路。　　2．FA信号通路的完整性受到破坏后增加了结直肠癌细胞对丝裂霉素 C的敏感性，对结直肠癌的化疗提供一种新的思路。