论文部分内容阅读
背景:I类组蛋白去乙酰化酶(HDAC)在许多肿瘤的发生发展中扮演着癌基因的角色。组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)作为I类HDACs在肿瘤中具有抑制癌细胞凋亡并促进癌细胞增殖的作用。MI192是一种新型HDAC3特异性抑制剂,在许多肿瘤细胞中显示出抗肿瘤活性。然而,HDAC3的作用及其抑制剂的抗肿瘤活性在胆管癌(CCA)中是未知的。目的:本研究旨在确定I类HDACs在胆管癌中的表达,并探讨HDAC3对胆管癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制。然后,我们确定HDAC3抑制剂的靶点以及评估它对胆管癌的治疗作用。方法:首先我们收集了 60例鼓楼医院手术样本的胆管癌样本。采用免疫组化技术检测I类组蛋白去乙酰化酶在癌组织和邻近正常胆管组织中的表达并分析与预后的关系。此外,我们还运用蛋白质印迹法检测9个胆管癌组织和2个正常胆管组织中的HDAC3蛋白表达水平。随后我们用siRNA-HDAC3和HDAC3质粒转染两株胆管癌细胞(HuCCT-l和RBE),用CCK8、集落形成和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。然后我们用HDAC3抑制剂处理胆管癌细胞株后通过CCK8和集落形成法来检测细胞活力变化情况。最后,我们采用裸鼠皮下移植瘤模型来评估在体内MI192对HDAC3抑制活性以及其抗肿瘤活性。结果:本实验结果证明了 I类HDACs中HDAC1、2和8在癌和癌旁表达无差异,与癌旁组织相比,HDAC3在肿瘤组织中上调,并与患者生存率降低有关。CCK8和集落形成测定显示结果提示,上调HDAC3可促进胆管癌细胞增殖,相反,下调HDAC3会抑制肿瘤细胞增殖。HDAC3抑制剂MI192可抑制胆管癌细胞生长,降低肿瘤细胞集落形成能力并诱导细胞凋亡。此外,用MI192处理裸鼠皮下移植瘤模型,发现裸鼠的肿瘤增殖受到抑制,同时凋亡增加,证实MI192的具有抗肿瘤活性。最后,我们证明HDAC3选择性抑制剂在体外和体内均可抑制HDAC3活性并抑制其下游靶标靶点的去乙酰化。总之,这些结果首次证明MI192通过靶向抑制HDAC3来抑制胆管癌细胞增殖和诱导肿瘤细胞凋亡。结论:本文研究结果表明HDAC3是细胞增殖和凋亡的关键调节因子,并与胆管癌患者预后不良有关。我们的研究结果首次揭示下调HDAC3可诱导胆管癌细胞凋亡,因此HDAC3选择性抑制剂在胆管癌的治疗上具有很好的前景。