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绵羊梅迪维斯纳病(Maedi visna disease,MVD)是由梅迪维斯纳病毒(Maedi visna virus,MVV)引起的一种多器官损伤可传播的疾病。该病可引起脑、肺脏、乳腺、关节等发生病变,一旦感染,最终引起死亡。MVD严重影响养羊业发展,给养羊业严重的经济损失。为鉴定内蒙古地区是否存在MVD,本试验从呼和浩特市周边某屠宰场采集12份病肺组织进行病理组织学和PCR鉴定。病理组织学结果显示:3份肺脏组织均发生纤维化,并且肺泡腔内Ⅱ型肺泡上皮细胞增生以及间质增宽,支气管和细支气管周围可见较多的淋巴滤泡增生;PCR检测结果显示:有3份肺组织为PCR阳性,测序序列与GenBank已登录的MVV KJ641278美国株同源率为87.4%;为了进一步确定3份肺组织确实有MVV感染,依据MVV全序列(登录号KJ641278)的LTR区设计1对引物,结果3份肺组织均为MVV阳性。通过病理组织学和PCR鉴定,确定内蒙古地区存在MVD。本试验为建立MVV特异性的巢式PCR检测方法,根据GenBank上发表的MVV(登录号KJ641278)基因序列设计合成巢式PCR引物,对采集的肺脏组织进行巢式PCR检测。结果显示:能够检测出3份阳性MVD病肺组织,灵敏度试验最低可检测到0.894 fg的病毒DNA,特异性检测结果显示与小反刍兽疫、绵羊支原体、肺炎双球菌、巴氏杆菌均无交叉反应。为探究病肺组织中MVV的病毒载量,本试验采用MVV的阳性质粒为模板进行定量PCR扩增,得出扩增曲线和标准曲线,建立荧光定量PCR检测方法,荧光定量PCR检测结果显示:能够特异性检测3份MVD阳性肺组织,且最低可检测 2.74×102copies/μL 的病毒 DNA。为鉴定临床采集的15份外周血白细胞是否感染MVV,本试验利用巢式PCR检测方法对其进行检测。结果显示:15份外周血白细胞检出8份为MVV阳性。因MVD和绵羊肺腺瘤病(Ovine pulmonary adenomatosis,OPA)时常会发生混合感染,所以为鉴定采集的病肺组织和外周血白细胞是否也感染OPA,本试验利用PCR、巢式PCR和联合诊断PCR进行检测分析。普通PCR检测结果显示:3份MVD 阳性肺组织均为OPA阳性,测序序列与GenBank已登录的JSRV基因序列(登录号JQ837489)内蒙株同源率为100%;巢式PCR检测结果显示:15份外周血白细胞中有10份为JSRV阳性;联合诊断PCR检测结果显示:能够在3份病肺组织中同时检测出MVV和JSRV阳性。以上结果表明内蒙古地区存在MVD感染,有时伴有OPA混合感染。本试验建立的巢式PCR检测方法能够用于MVD的特异性检测,荧光定量PCR可用于MVV的病毒载量检测,两种检测方法均具有特异性好、灵敏度高的优势,本研究对MVD的早期诊断提供了方便、经济实用的检测技术,为内蒙古地区MVD的研究奠定了基础。