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大肠埃希菌作为条件致病菌之一,与动物的健康密切相关,也是引起奶牛场常见疾病如犊牛腹泻、乳房炎及子宫内膜炎等的主要病原菌。中国是一个抗生素使用大国,作为治疗或添加剂使用在动物身上的抗生素数量惊人。一些临床常用抗生素,如β-内酰胺类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类已逐渐减弱甚至丧失疗效。动物源大肠埃希菌的耐药性不仅会制约畜牧业的发展,同时会通过食物链、空气、土壤及水源污染等途径传播,与人类的健康也息息相关。目前,关于动物源大肠埃希菌耐药性的报道在世界范围已逐年增多且极具多样性,引起了各国研究人员的关注。超广谱β-内酰胺酶(Extended spectrumβ-lactamases,ESBL)能够水解超广谱头孢菌素类抗生素,编码该酶的基因多由质粒携带,以极快的速度在人类及动物中蔓延,导致了严重的细菌耐药性。本研究从陕西关中地区犊牛粪便样品中分离鉴定产ESBL的大肠埃希菌,检测其耐药特征及分子流行病学分型,研究其传播机制,取得结果如下:1.从陕西关中地区4个奶牛场分离到75株大肠埃希菌,经过ESBL表型确证试验表明59株(78.67%)产ESBL且皆表现为多重耐药。59株ESBL阳性大肠埃希菌中blaCTX-M、blaTEM-1、blaCMY-2和bla DHA-1的检出率分别为100.00%、67.80%、3.39%和1.70%,blaCTX-M-55(n=36)是最主要的blaCTX-M基因。42.37%的ESBL阳性菌株携带16S r RNA甲基化酶基因,18株同时携带rmtB和blaCTX-M-55;67.80%的ESBL阳性菌株至少携带一个PMQR基因,其中以qnr S(70.00%)最常见。值得注意的是,1株菌同时携带blaCTX-M-55、blaTEM-1、blaDHA-1、blaCMY-2、rmtB、qnrS、qnrB、aac(6’)-Ib-cr 8种基因。2.产ESBL大肠埃希菌最常见的系统发育组为C组,表明本试验分离的产ESBL大肠埃希菌多为共生型;在59株产ESBL大肠埃希菌中检测到27种不同的ST型,其中ST744为主要流行的ST分型,ST23CC为主要的克隆复合体,表明该地区产ESBL大肠埃希菌有一定的遗传多样性。3.选取36株携带blaCTX-M-55的ESBL阳性大肠埃希菌进行接合转移试验,28株可通过接合转移将质粒转移至E.coli 26R793,其中10(10/18,55.56%)株菌携带的rmt B基因伴随着blaCTX-M-55基因成功转移到E.coli 26R793。在36株携带blaCTX-M-55的供体菌及28株接合子中共同检测到Inc FIB、Inc I1、Inc Frep B和Inc N 4种不同型的复制子,其中以Inc FIB型为主;此外,菌株获得的外源耐药基因可稳定遗传,不影响其生长趋势;ISEcp1元件为blaCTX-M-55基因在不同菌株间的传播及扩散提供了有利条件。