【摘 要】
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草甘膦是橡胶树种植过程中最常使用的除草剂之一,由于使用过程中药剂漂移,常造成橡胶树叶片畸形甚至脱落等药害。ABA具有增强植物抗逆性的功能,但其在橡胶树对草甘膦等逆境抗
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草甘膦是橡胶树种植过程中最常使用的除草剂之一,由于使用过程中药剂漂移,常造成橡胶树叶片畸形甚至脱落等药害。ABA具有增强植物抗逆性的功能,但其在橡胶树对草甘膦等逆境抗性的调控机制尚不清楚。为研究ABA对橡胶树受草甘膦药害的调控机制,本研究采用植物生理学、分子生物学和生物信息学等技术分析ABA喷施对草甘膦药害的缓解作用;在橡胶树基因组数据库中全面搜索、鉴定ABA信号途径相关成员,并分析各个基因家族成员在草甘膦胁迫与ABA处理下的基因表达模式,结果如下:1、在200μumol.L-1草甘膦处理过的橡胶树芽接苗叶片喷施200μmol·L-1ABA,发现ABA可有效缓解草甘膦对橡胶树芽接苗的药害症状。2、从橡胶树叶片中克隆了6个HbSnRK2成员,HbSnRK2.4属于Group Ⅰ亚族,HbSnRK2.2、HbSnRK2.6和HbSnRK2.7属于Ⅱ亚族,HbSnRK2.3a和HbSnRK2.3b属于Ⅲ亚族。基因结构分析表明,HbSnRK2蛋白具有保守的N端区域和多样的C端序列。6个HbSnRK2基因的启动子区域都含有大量响应激素及胁迫的调节元件,它们的氨基酸序列中共存在9个motif。6个HbSnRK2基因的表达具组织特异性,在ABA处理下的上调倍数高于其他激素处理下的表达;受干旱胁迫下调,大部分基因响应白粉菌和高温胁迫;Ⅲ亚族基因被草甘膦和ABA诱导上调显著,受草甘膦及ABA共同调控。3、鉴定了95个橡胶树PP2C基因,这些基因均包含PP2C磷酸酶结构域,在系统发生学上被分为13个亚族(A-M),具有11个motif。qRT-PCR分析表明,HbPP2C基因广泛响应草甘膦和ABA处理,尤其是A亚族HbPP2C成员在草甘膦和ABA处理下表达上调最明显。4、鉴定了85个橡胶树bZIP基因,依据与拟南芥和水稻的亲缘关系将其分为10个亚族,这些基因含10个motif。qRT-PCR分析表明,HbbZIP基因在草甘膦与ABA处理下差异表达。HbbZIP68在草甘膦处理下上调显著,并同时受ABA诱导。综上,外源ABA可缓解草甘膦对橡胶树的药害作用,增加橡胶树的抗逆性。分析ABA信号家族成员HbSnRK2、HbPP2C和HbbZIP差异响应机制可知,HbSnRK2的Ⅲ亚族基因与ABA关系密切,A亚族HbPP2C基因与草甘膦抗性相关,HbbZIP68受草甘膦特异性调控。本研究为解析ABA信号转导途径中的基因家族成员在橡胶树抗草甘膦胁迫的机制打下理论基础,为开发以ABA为核心组分的草甘膦药害保护剂提供支撑。
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