论文部分内容阅读
研究背景及目的原发性高血压(Essential hypertension, EH)是心血管疾病最重要的危险因素,世界上大约三分之一的成人患有高血压。据我国最近的调查研究显示,我国高血压的患病率为33%,并且患病率逐年增长。原发性高血压是一种由生活方式,环境因素以及遗传因素共同作用引起的复杂性遗传性疾病。尽管研究显示高血压有明显的家族聚集性,但现有的单纯以DNA碱基序列为基础的全基因组关联研究结果却仅能解释不到1%的血压变异性。显然,传统的孟德尔遗传学并不能解释高血压的发生发展。研究表明,即便是同卵双生型双胞胎中,EH一些生物学特点也不一致,比如血压水平,发生时间以及进展过程等,这些特点很难用传统的遗传学定律来解释。这些研究结果显示,表观遗传学因素可能参与EH的发生发展。表观遗传修饰是指不涉及DNA碱基序列,能影响基因表达的可遗传性改变,包括DNA甲基化,组蛋白乙酰化等。目前,已有多个动物学实验表明DNA甲基化在EH的发病机制中扮演着重要角色。然而,目前为止,仅有很少有研究涉及DNA甲基化在人类EH发病机制中的作用。并且,在中国人群中,还没有关于EH的全基因组甲基化研究。近期有研究表明,炎症在EH的发生发展中起着重要的作用,因而我们推测外周血白细胞DNA甲基化改变参与EH的发病机制。本研究拟采用甲基化芯片以及表达谱芯片的方法寻找EH患者与正常对照志愿者外周血白细胞DNA甲基化的差异位点以及甲基化对差异基因mRNA表达的影响,并进一步对差异基因进行细胞学功能验证。方法我们的研究入选了13例单纯高血压患者和13例年龄匹配的正常对照志愿者,均为男性。所有入选人群年龄均在50岁以上,且无心脑血管事件。单纯高血压的入选标准为收缩压≥160mmHg或舒张压≥100 mmHg或正在服用降压药物且无肥胖(18.5 kg/m2≤BMI≤24 kg/m2),正常对照组入选标准为18.5 kg/m2≤BMI≤24 kg/m2,且收缩压<140 mmHg和舒张压<90 mmHg;而后利用他们的外周血白细胞DNA及RNA进行全基因组甲基化研究和表达谱研究。在发现差异基因后,我们进一步在HK-2细胞中验证了该基因在EH中的作用。结果我们的甲基化芯片结果显示,与正常对照组相比,高血压组MAP2K3基因的一个CpG位点甲基化水平降低,但差异并不显著。而表达谱芯片结果发现,MAP2K3基因的mRNA表达水平在高血压组中升高。随后,我们的细胞学功能实验结果表明,MAP2K3/p38信号通路参与AngⅡ对细胞ACE/ACE2表达的调控。结论我们的研究发现NAP2K3基因上的一个CpG位点的甲基化水平降低,并且我们的表达谱芯片结果表明MAP2K3的表达水平升高了,两者综合表明,MAP2K3基因的甲基化可能在原发性高血压的发病机制中扮演着重要角色。我们的细胞功能试验表明MAP2K3/p38信号通路参与AngⅡ对细胞ACE/ACE2的调控。