【摘 要】
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研究背景:糖尿病（diabetes mellitus,DM）目前在全球健康领域备受关注,我国糖尿病患者现已居世界首位,糖尿病角膜上皮病变已逐年受到广泛的关注,其主要症状主要以角膜上皮点状缺损、复发性糜烂以及损伤迁延不愈为特征,严重影响患者的生活质量。Wnt/β-Catenin信号通路在生物体内广泛存在,调控着生物体内多种生命活动过程,其中β-Catenin为Wnt/β-Catenin信号通路的核心
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研究背景:糖尿病（diabetes mellitus,DM）目前在全球健康领域备受关注,我国糖尿病患者现已居世界首位,糖尿病角膜上皮病变已逐年受到广泛的关注,其主要症状主要以角膜上皮点状缺损、复发性糜烂以及损伤迁延不愈为特征,严重影响患者的生活质量。Wnt/β-Catenin信号通路在生物体内广泛存在,调控着生物体内多种生命活动过程,其中β-Catenin为Wnt/β-Catenin信号通路的核心因子,通过β-Catenin入核,从而激活下游靶基因的转录。目前已有研究证实在糖尿病大鼠中有β-Catenin表达下降和延迟表达的现象,并且激活Wnt/β-Catenin信号通路能够促进糖尿病大鼠皮肤损伤的愈合,但是目前尚没有Wnt/β-Catenin信号通路在糖尿病角膜上皮损伤修复过程中作用的研究报道。目的:本研究旨在以链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ）构建的I型糖尿病小鼠为研究对象,研究氯化锂（Lithium Chloride,LiCl）在糖尿病小鼠角膜上皮损伤修复中的作用及其作用机制,以期促进糖尿病角膜上皮病变的诊疗实施,从而丰富相关诊疗理论基础。方法:实验动物选用的是6周龄C57BL/6J雄性小鼠,以链脲佐菌素腹腔注射构建I型糖尿病小鼠。本实验的实验分组:（1）实验未刮除小鼠角膜上皮（未做任何处理）:正常组（CON）、糖尿病组（DM）;（2）刮除小鼠角膜上皮组:正常组（CON1）、正常+LiCl组（CON1+）、糖尿病组（DM1）、糖尿病+LiCl组（DM1+）;（3）实验眼为每只实验小鼠的右眼,并将左眼不做处理作为对照眼。所用实验方法为:（1）用2.5mm环钻以及电动上皮刮刀做小鼠角膜上皮损伤模型并拍照,用Image J软件计算角膜上皮缺损面积并分析各组小鼠角膜上皮愈合率,以研究LiCl在小鼠角膜上皮损伤修复中的作用;（2）通过Western blot实验、RT-q PCR实验以及免疫荧光实验来检测正常与糖尿病小鼠中β-Catenin、Wnt7a、Cyclin D1、P-GSK3β与GSK3β相关基因及蛋白的差异表达;（3）通过Western blot实验来检测LiCl对小鼠角膜上皮损伤修复过程中Wnt/β-Catenin信号通路中的β-Catenin、Wnt7a、Cyclin D1、P-GSK3β与GSK3β蛋白表达水平的影响;（4）通过RT-q PCR实验来检测LiCl对小鼠角膜上皮损伤修复过程中Wnt/β-Catenin信号通路中的β-Catenin、Wnt7a、Cyclin D1基因表达水平的影响;（5）通过免疫荧光实验来检测LiCl对小鼠角膜上皮损伤修复过程中Wnt/β-Catenin信号通路中的β-Catenin、Wnt7a、Cyclin D1、P-GSK3β与GSK3β蛋白表达分布的影响。结果:通过实验未刮除小鼠角膜上皮（未做任何处理）:正常组（CON）、糖尿病组（DM）以及刮除角膜上皮:正常组（CON1）、正常+LiCl组（CON1+）、糖尿病组（DM1）、糖尿病+LiCl组（DM1+）对相应分组的小鼠所做的实验显示:（1）刮除各组小鼠角膜上皮后并在刮除后0h、12h、24h及36h时分别行荧光素钠染色并拍照,用Image J软件分析角膜上皮缺损面积并分析发现LiCl能促进小鼠角膜上皮的损伤修复。（2）在对未刮除小鼠角膜上皮（未做任何处理）:正常组（CON）与糖尿病组（DM）小鼠做Western blot实验、免疫荧光实验以及RT-q PCR实验结果表明糖尿病小鼠角膜上皮Wnt/β-Catenin信号通路中β-Catenin、Wnt7a、Cyclin D1以及P-GSK3β蛋白表达水平少于正常小鼠,糖尿病小鼠角膜上皮Wnt/β-Catenin信号通路中β-Catenin、wnt7a以及Cyclin D1基因表达水平少于正常组;（3）Western blot实验结果显示LiCl可上调β-Catenin、Wnt7a、Cyclin D1、P-GSK3β蛋白的表达;（4）RT-q PCR实验结果显示LiCl可上调β-Catenin、Wnt7a、Cyclin D1基因的表达;（5）免疫荧光结果显示LiCl能促进小鼠角膜上皮β-Catenin的表达,并能促进核内转位,LiCl也能促进β-Catenin、Wnt7a、Cyclin D1、P-GSK3β蛋白的表达。结论:LiCl能通过激活Wnt/β-Catenin信号通路来促进糖尿病小鼠角膜上皮损伤的修复。这为糖尿病角膜上皮病变的治疗提供了新的理论基础。
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