前言 p21(cip1／waf-1／sid1／cap20)是CDI类蛋白家族主要成员，它能结合cyclin-cdk复合物进而调节细胞周期的进程。本实验研究p21在大鼠移植静脉中的表达规律，分析p21对血管平滑肌细胞增殖的影响，为下一步转染p21提供理论基础并为从分子水平防治移植静脉再狭窄提供帮助。 方法 1．动物模型建立 250克左右，3个月龄Wistar大鼠36只，雌雄各半，随机分成6组，每组5只。取0.5厘米长自体颈静脉移植到同侧颈总动脉上，分别于术后1、7、14、21、28、42天切取移植静脉及对侧正常动、静脉，进行下列检测。 2．指标检测 (1)组织学观察：HE染色、Verhoeff弹力纤维染色，采用计算机图象分析仪测量内膜，了解内膜增生情况。 (2)p21与PCNA的免疫组化染色：观察血管平滑肌细胞内p21产物的动态变化及血管平滑肌细胞增殖情况，分析p21表达对血管平滑肌细胞增殖的影响。 (3)p21 RT-PCR：对p21 mRNA进行半定量检测，观察同上。 3．免疫组化观察方法及统计学分析 记数阳性细胞所得数据用阳性率(％)表示，每组数据以(?)±s表示，所有数据在SPSS 11.0下进行处理，经方差分析及t检验，P＜0.05有统计学意义。结果 术后14天，移植血管出现增生的内膜，28天时，血管内腔面基本完成内皮化，内膜增厚明显。 正常动、静脉血管细胞中未见pZI蛋白阳性表达，而实验组第1天可见少量pZI表达阳性细胞并随时间增加。到第21天，P21在接近一半内膜细胞中表达，主要集中在较底的内膜区域内，阳性细胞百分比达46.2土5.3%，达到高峰，与14天组和28天组‘比较，有显著差异(P<0.05)。之后，p21表达随时间下降，到第42天，仅，见少量 p21阳性细胞(3.2土0.3%)。正常动脉和静脉无p21 mRNA表达。术后1天组，pZI mRNA开始少量表达并逐渐增多。术后21天时，p21m砂认表达达到高峰，与术后14天组和28天组比较，差异显著(P<0.05)。随后，P21 mRNA表达开始下降。后者与P21蛋白变化趋势一致。 正常动、静脉平滑肌细胞仅极少量呈PCNA染色阳性。术后1天，移植静脉可见PCNA阳性细胞。术后7天时，移植血管平滑肌细胞增殖达到高峰(46.3士5.2%)，14天后增殖仍很显著(28.2士2.5%)。随后，PCNA阳性细胞数迅速降低，42天时下降已很明显(6.6士0.7%)。讨论 细胞周期受到细胞周期控制系统的调节和控制。cychn与cdk结合可驱动细胞周期，CDI能竞争性地与c(lk结合，抑制其活性，从而调整细胞周期的进展速度。第一个被发现的CDI类蛋白是P21，又称为cipl/waf-l/sidl/eaPZO。 本实验结果显示PCNA阳性细胞在术后第1天即出现并迅速增加，术后第7天达高峰。而碑1在术后第1天开始表达(mRNA及蛋白水平)并缓慢增加，术后第7天表达达到一定水平后PCNA阳性细胞数迅速下降。当p21在术后第21天表达达到高峰时，PcNA阳性细胞数下降已很明显，提示二者之间具有相关性。另外，本研究显示pZI mRNA表达变化趋势与解1蛋白表达一致，提示pZI调节可能位于mRNA水平。 综上所述，静脉移植后1一21天，内源性户1以一个增加的水平表达并与PCNA及内膜细胞增殖下降相联系.。这一发现提示p21在静脉移植早中期表达并自然地发挥作用诱导内膜细胞增殖停滞。但这时血管平滑肌细胞已大量增殖，内膜增厚。本实验结果提示如将pZI作为靶基因在静脉移植时试行转染移植静脉使之早期表达，可能抑制血管平滑肌细胞增殖，从而提供一种治疗移植静脉再狭窄的方法。结论 静脉移植后1一3周，内源性解l(不论mRNA还是蛋白)以一个增加的水平表达，3周后下降。内源性解1表达增加与PCNA及血管平滑肌细胞增殖下降相联系，可能自然地发挥作用诱导内膜细胞增殖停滞。可作为靶基因试行转染移植静脉，抑制血管平滑肌细胞增殖。