百合无症病毒(Lily symptomless virus,LSV)属于香石竹潜隐病毒属(Carlavirus),是严重影响百合生产的主要病毒之一,给百合种植业造成极大的经济损失。RNA干扰(RNAi)介导的病毒抗性是近年发展起来的一种新的抗病毒基因工程策略,它是通过双链RNA介导诱发的、高效特异性降解同源mRNA的现象。本研究以感染百合无症病毒(LSV)的东方百合卷丹百合叶片总RNA为模板,利用反转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出876bp的LSV CP基因,通过序列分析找到440bp保守序列。应用Gateway技术将扩增的LSV CP基因全长和LSV CP基因保守序列片段分别通过BP反应连接到入门载体pDONR201,再通过LR反应将目的片段插入到RNAi植物表达载体pH7GWIWG2(Ⅱ),通过瞬时表达检测所构建RNAi载体的抗病性,分析不同长度dsRNA对RNAi载体的抗性的影响。然后通过农杆菌介导,转化百合,获得抗LSV百合转基因品种。本研究取得的主要结果如下:(1)扩增出876bp的LSV CP基因。生物软件分析表明克隆片段覆盖了LSV CP基因的全长序列,含有一个开放阅读框架,编码291个氨基酸,蛋白分子量为32KD,等电点pI为7.02;亲缘性比较表明,LSV大连卷丹分离物与Genebank上其他分离物具有较高的同源性,达到95%以上。(2)利用Gateway技术分别将LSV CP基因不同长度的目标片段插入载体,构建了两个含不同长度LSV CP基因反向重复的RNAi载体。(3)瞬时表达检测载体抗性表明所构建RNAi载体对LSV有一定的抑制性。(4)索邦百合的潮霉素筛选浓度为15 mg/L。(5)先在无Hyg的培养基中培养一周,再进行抗生素筛选有利于百合转化。(6)通过PCR检测证实已经获得了转基因百合。