乳腺癌是女性最常见的肿瘤疾病,近年来,发达国家和发展中国家中患病人数有不断增加的趋势。研究表明,人类的乳腺癌细胞中存在CDK4基因的过度扩增、突变和高表达,CDK4可作为肿瘤临床治疗的靶点。近年来兴起的胞内抗体(intracellular antibodies)技术通过在抗体基因序列的N端或C端引入亚细胞器定位信号,使抗体定位在特定的亚细胞区,从而靶向失活细胞内目标蛋白分子。与RNAi或反义技术等相比,在细胞内胞内抗体相对半衰期较长,可直接与目标蛋白结合发挥长时间的有效作用,越来越受到研究者的关注。本研究从细胞水平体外活性分析和动物水平体内活性分析两方面验证了肿瘤特异性抗CDK4人源胞内抗体NLS-AK具有良好的抗肿瘤作用,通过RT-PCR、Western-blot实验检测NLS-AK基因在mRNA水平和蛋白水平上的表达;免疫沉淀实验检测NLS-AK与MCF-7细胞内CDK4分子的靶向结合;间接免疫荧光实验检测NLS-AK定位于细胞核区域;流式细胞术分析NLS-AK诱导MCF-7细胞凋亡,引起MCF-7细胞G1期阻滞情况。为了进一步验证NLS-AK的抗肿瘤效应,我们建立了裸鼠异体移植瘤治疗模型,通过分析瘤体生长情况、计算瘤重抑制率、观察肿瘤组织HE染色,证明NLS-AK能够有效抑制裸鼠体内乳腺癌异体移植瘤的生长,具有良好的抗肿瘤作用,本实验为NLS-AK胞内抗体的乳腺癌临床治疗提供了重要的理论基础和实验依据。