雪卡毒素的提取鉴定及其细胞毒性与降解研究

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雪卡毒素是一种具有神经毒性的海洋藻类毒素。雪卡毒素主要由一种腰鞭毛藻-冈比尔盘藻产生,首先在食草鱼体内积累,然后通过食物链转移到大型食肉鱼类体内最终到人类体内。人们食用了含有雪卡毒素的鱼类会引起中毒,伴随着肠胃系统、神经系统、心血管系统症状,个别严重者可能会瘫痪、昏迷和死亡,是目前世界上报道最多的海洋生物毒性疾病。全世界范围内每年因食用热带鱼而中毒的人数约有50000人。近年来广东、香港等地经常发生雪卡毒素中毒事件,严重威胁着人们食用海洋鱼类安全。为了给雪卡毒素中毒的预防及检测提供借鉴,本论文对雪卡毒素的提取鉴定,细胞毒性及降解进行了研究。方法:雪卡毒素在鱼体内含量甚微,主要存在鱼的内脏中。本文在国内外学者研究基础上,建立了一种从石斑鱼肝脏中快速提取雪卡毒素的方法,并经过Florisil柱、固相萃取柱和Sephadex LH-20柱纯化制得了高纯度的雪卡毒素提取物。用高效液相色谱(HPLC)法对太平洋雪卡毒素-1(P-CTX-1)与提取物进行对比分析;应用高效液相色谱/质谱(HPLC/MS)法对提取纯化的雪卡毒素进行扫描鉴定;接着以乌本苷/藜芦定为激活剂,验证了雪卡毒素提取物对人神经母细胞瘤(SK-N-SH)的细胞毒性作用。最后研究了不同初始溶液浓度,不同光源下TiO2-ZnO纳米复合胶片对雪卡毒素的光降解效果。实验结果:(1)本文成功建立了一种从鱼体内快速提取纯化雪卡毒素的方法;(2)以215nm为检测波长,HPLC检测分析雪卡毒素标准品与提取物在8.705min处有相同的保留时间;(3)HPLC/MS扫描雪卡毒素纯化物,检测出纯化样品在m/z=1111.3和m/z=1133处有雪卡毒素[M+H]+峰和[M+Na]+峰,与Lewis(?)报道的P-CTX-1分子离子峰完全吻合;(4)验证了雪卡毒素提取物不仅对在细胞形态,而且对细胞活力都有影响。利用MTT法分析了不同剂量雪卡毒素对SK-N-SH的毒性作用,毒素剂量与抑制率成线性关系,确定了雪卡毒素的检测限到·0.1ng/mL, IC50=200ng/mL。利用细胞毒性试验不仅能检测出提取物中有对神经细胞毒性作用的雪卡毒素存在,而且能定量检测雪卡毒素含量;(5)确定了TiO2-ZnO纳米复合胶片在紫外光照射下,雪卡毒素溶液浓度为2mg/L,光催化降解速率和效果均达到最好,40min内就能完全降解。结论:本课题成功地从石斑鱼鱼肝内提取纯化出高纯度的雪卡毒素,经HPLC/MS法与细胞毒性试验鉴定为P-CTX-1,同时研究了TiO2-ZnO纳米复合胶片对雪卡毒素的光降解条件及作用。本课题为我国雪卡毒素相关研究工作奠定了基础。
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