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目的:骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是造血基质细胞的祖先细胞,在特定条件下可向成骨细胞、成软骨细胞、肌腱、脂肪细胞、血管内皮细胞及神经细胞样细胞分化,且易于获得及扩增,是细胞替代治疗和组织工程研究中常用的种子细胞。本研究从大鼠骨髓中分离培养骨髓间充质干细胞,初步探讨其向心肌细胞定向分化机制以及移植治疗心肌梗死的可行性,为进一步临床研究和运用奠定基础。 方法:(1)分离大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs),通过常规培养,在体外观察其生长特性、抗原表达等特征;(2)分离培养新生大鼠的心肌细胞,观察其在体外培养的生长特性、特异性抗原表达等特征;(3)体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞定向分化并采用免疫荧光、RT—PCR等方法对诱导后细胞进行鉴定;(4)建立大鼠心肌梗死模型并以心电图、心脏超声和血心肌酶谱鉴定;(5)运用诱导前后的骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠心肌梗死模型,并以心功能相关指标评价疗效。 结果:(1)由骨髓分离培养得到的间充质干细胞呈梭形贴壁生长,生长迅速,可大量繁殖。运用免疫荧光和流式细胞仪检测显示该群细胞高表达CD54(ICAM-1)、CD90(thy-1)分子,其中一小部分细胞亚群表达CD45分子。(2)由新生大鼠心肌组织分离培养得到心肌细胞呈簇样生长并重叠成致密有边界的细胞团,并出现节律性收缩,经免疫荧光检测表达心肌细胞特异的MHC(myosin heavy chain)、desmin和connexin分子。(3)经5umol/L和10umol/L 5-aza诱导后的间充质干细胞表面均可检测到MHC、connexin和desmin分子,其中10umol/L5-aza诱导后的心肌样细胞表达较强;经20 g/L和100 g/L复方香丹注射液诱导的心肌样细胞均可表达MHC、connexin和desmin分子,尤以20 g/L浓度组表达较强,阳性率可达95%左右,且细胞生长状态良好,当香丹浓度达到250g/L以上时,细胞形态开始不规则,边界不清。(4)心肌梗死模型建立后心电图ST段抬高,超声心动图可见明显的心梗区域,心梗后24小时血心肌酶谱测定显示