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目的通过高危型HPV16/18感染状况分析,探讨HPV感染对宫颈病变早期筛查的价值。构建表达HPV16E6并去掉其致癌性的重组巨细胞病毒,为研制HPV16治疗性疫苗奠定基础。方法选择227例不同宫颈病变患者作为研究对象,以妇科健康体检者138例作为对照。应用聚合酶连反应(PCR)分析宫颈脱落细胞HPV16/18感染状况。设计HPV16E6突变型(以消除其致癌性)及HPV16E6野生型引物,通过PCR扩增HPV16E6突变型和野生型片段,凝胶回收纯化突变型和野生型PCR扩增产物。将HPV16E6突变型和野生型DNA片段电转到Towne galk感受态细胞中,并进行克隆筛选及检测。通过中提质粒DNA转染到ARPE细胞中,观察突变型和野生型HPV16E6基因重组巨细胞病毒在细胞中的表达。结果宫颈炎患者93例,HPV16阳性6例,HPV18阳性4例,两者均阳性1例;宫颈上皮细胞内瘤变(包括CINⅠ、Ⅱ及Ⅲ级)患者98例,HPV16阳性24例,HPV18阳性10例,两者均阳性7例;宫颈癌患者36例,HPV16阳性15例,HPV18阳性5例,两者均阳性9例。宫颈上皮细胞内瘤变与宫颈癌患者中,HPV16感染较HPV18感染多见,HPV16/18阳性率随宫颈病变的严重程度增加而上升,差异有统计学意义(P<0.01)。三组不同宫颈病变患者的HPV16/18感染的年龄分布也存在差异,差异有统计学意义(P<0.01)。通过PCR扩增分别获得了HPV16E6突变型(分别将E6第57位的亮氨酸、第110位及第113位半胱氨酸变为甘氨酸,消除E6基因致癌性)及野生型片段,经过电转、Galk及脱Galk克隆筛选,获得了携带HPV16E6突变型及野生型Towne细菌人工染色体;质粒提取后,通过脂质体介导转染到ARPE细胞,检测后,表明成功构建了携带HPV16E6突变型及野生型重组巨细胞病毒。结论1、HPV16和18感染阳性率与宫颈病变的严重程度密切相关,提示可通过HPV16和18感染的早期筛查,及时发现宫颈病变患者。2、获得了带有HPV16E6突变型和野生型基因的重组巨细胞病毒,为HPV16E6治疗性疫苗的研究奠定了基础。