呼和浩特牛腹泻部分细菌性病原检测及三重PCR检测方法的建立

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sidagongsi
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牛细菌性腹泻是以腹泻、脱水为主要症状的一类消化道疾病。其主要病原为致病性大肠杆菌和沙门氏菌。为研究呼和浩特地区牛细菌性腹泻病原的流行特征,本试验采集呼和浩特周边地区8个规模化牛场219份新鲜粪样进行牛腹泻细菌性病原的检测,分离大肠杆菌和沙门氏菌进行形态学和生化鉴定,确定大肠杆菌阳性粪样170份,阳性率为77.6%;沙门氏菌阳性粪样30份,阳性率为13.7%;选取腹泻粪样分离的75株大肠杆菌进行血清学鉴定,确定27株为致病性大肠杆菌,阳性率为36.0%,其中ETEC 22株,为2株O168,1株O27,1株O6-O28,3株O20,1株O6,2株O15,4株O153,1株O126,2株O128,2株O8,1株O159,2株O25;EPEC 4株,为1株O26-O55,1株O114,1株O127,1株O125,EAEC 1株为O44;选取其中5株致病性大肠杆菌进行小鼠攻毒试验,试验小鼠均致病。对75株大肠杆菌进行药敏试验,结果表明对磺胺类的复方磺胺甲基异恶唑的耐药率高达78.7%;对亚胺培南耐药率最低,为9.3%;多重耐药率高达96%;最多对13种抗菌药物耐药,占1.3%;主要集中对5~7种抗菌药物耐药,占56%。为快速检测引起牛腹泻的主要致病性大肠杆菌ETEC和沙门氏菌,本研究根据ETEC的毒力基因ST和LT以及沙门氏菌的毒力基因inv A建立三重PCR检测方法,能够特异性检测两种细菌性病原。检测ST,LT和inv A的灵敏度分别为3ng/μl、4.5ng/μl、3ng/μl。用本试验建立的方法检测85份临床样品,ETEC阳性样品15份,阳性率为17.6%;沙门氏菌阳性样品10份,阳性率为11.8%。本试验为呼和浩特地区牛腹泻的防治工作提供了科学依据和技术支持。
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