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睾丸支持细胞(Sertoli cell, SC)是曲细精管上皮中一种非常重要的功能细胞,为生精细胞的分化成熟提供激素、脂类、维生素等多种营养物质；与生精细胞构成睾丸曲细精管的主要组织结构。SC的功能主要受下丘脑—垂体—性腺轴的内分泌调节,血睾屏障功能使生精细胞受到良好的保护。睾丸支持细胞能支持生精细胞的数量是有限的,因此睾丸支持细胞的数量在一定程度上决定了睾丸产生精子的数量。FSH在0-50ng/ml的浓度能以剂量依赖的方式促进睾丸支持细胞增殖,但当FSH浓度过高时,FSH的促增殖作用有所下降；17β-雌二醇在培养条件下能促进未成熟的大鼠或仔猪支持细胞增殖,并且它们都与cANP、ERK1/2信号通路有关,但FSH和17β-雌二醇联合作用时如何调节培养条件下未成熟仔猪睾丸支持细胞中Skp2的表达并不清楚。因此,本研究以体外培养的仔猪睾丸支持细胞为研究对象,通过添加各种信号通路的抑制剂,应用Western Blottingting和实时荧光定量PCR等方法,检测Skp2蛋白和mRNA在FSH和17β-雌二醇联合调节支持细胞增殖中的的表达,以阐明FSH和雌激素联合作用时通过何种信号通路调节Skp2的表达,为进一步认识睾丸支持细胞增殖的分子机制奠定基础。本实验以(?)为研究对象,用FSH(50ng/ml)和17β-雌二醇(10-9mol/L)联合处理支持细胞0min、15min、30min、60min、90min后,收集细胞提取蛋白和RNA,用Western blotting检测Skp2的表达量,用荧光定量PCR检测Skp2 mRNA的表达。结果发现,FSH和17β-雌二醇共同作用促进了Skp2蛋白的表达,30min时,蛋白的量最大,此后Skp2蛋白的表达有所下降,到90min时,Skp2蛋白的表达量与对照相比无显著差异；FSH和17β-雌二醇共同作用15min后,Skp2 mRNA的表达量增加了1.93倍(P<0.05),到30min时,Skp2 mRNA的表达量最大,与对照相比,增加了7.39倍(P<0.05),此后Skp2的表达有所下降,到90min时,Skp2 mRNA的表达量降为对照组的3.06倍(P<0.05)；实验证明FSH和17β-雌二醇共同作用可以促进Skp2蛋白和mRNA的表达。进一步实验研究了cAMP、PKA、Ca2+和ERK对FSH和17β-雌二醇联合作用诱导Skp2表达的影响。加入cAMP的促进剂Forskolin促进了Skp2蛋白的表达,但其促进作用弱于FSH或17β-雌二醇的作用。分别加入环磷酸腺苷抑制剂(Rp-cAMP)、蛋白激酶A(PKA)抑制剂(H-89)、L—Ca2+离子通道抑制剂(Verapamil)和ERK1/2抑制剂(U0126)时,它们都抑制了FSH和17β-雌二醇共同诱导的Skp2蛋白的表达；并且Forskolin明显促进了Skp2 mRNA的表达,与对照相比增加了8.98倍(P<0.05),但略低于FSH或17β-雌二醇的作用(P>0.05)。Rp-cAMP、H-89、Verapamil、U0126都影响了FSH和17β-雌二醇共同作用时Skp2 mRNA的表达,Skp2 mRNA的表达水平与FSH和17β-雌二醇共同作用相比分别下降了50.66%、53.96%、51.46%、57.97%(P<0.05)。本实验还分析了PKA、Ca2+对ERK1/2在支持细胞内活性的影响。结果发现,与对照相比,FSH和17β-雌二醇共同作用增强了ERK1/2的活性,但效果与FSH和17p-雌二醇单独作用相比无明显差异。H-8、Verapamil单独作用时,ERK1/2的活性与对照相比无明显差异,但它们与FSH和17β-雌二醇共同作用时都降低了ERK1/2的活性。结论：FSH与17β-雌二醇联合作用激活了cAMP-PKA级联和Ca2+内流,而PKA和Ca2+内流又通过影响ERK1/2的活性进而增强了Skp2的表达。