肠道菌群组改变与结肠癌发生发展的相互关系

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目的探索与结肠癌发生发展相关联的结肠粘膜菌群结构特点或具体菌属以及正常个体不同部位结肠粘膜菌群特点。方法肠镜下,运用一次性活检钳钳取结肠粘膜组织,共取结肠癌患者32例、正常志愿者31例,结肠癌患者钳取癌区与癌旁(>5cm)组织,粘膜正常的志愿者则钳取升结肠、横结肠和降结肠三个位置。排除肥胖、抗菌素服用、炎症性肠病(克劳恩病和溃疡性结肠炎)、慢性便秘或腹泻和代谢性疾病如糖尿病等因素,及时随访肠癌患者手术情况及病理和肿瘤分期,最终选取符合标准的样本:结肠癌21例、正常志愿者20例。提取各自粘膜总DNA,常规细菌16S-rRNA全长引物和V3区引物逐次PCR扩增各个样品。定量产物后,用PCR-DGGE技术分别比对癌症患者自体癌区与癌旁菌群差异、正常志愿者自体内部不同部位粘膜菌群差异和正常志愿者不同位置粘膜菌群与相应位置癌症患者癌区粘膜菌群间的结构差异,选取有意义的条带割胶测序,并与基因库进行比对,明确菌属。结果经筛选结肠癌患者按不同位置分作三组,升、横、降结肠癌患者各5例、6例、10例,分别用DGGE方法比较癌区与癌旁的菌群结构,相关软件分析其多样性和丰度无明显差异;正常志愿者20例,同样方法比较其自体内部不同位置粘膜菌群的差异,结果发现三个位置粘膜菌群结构几乎无差异。然而当按相对应位置比对正常志愿者与癌症患者粘膜菌群差异时发现,两者菌群结构差异明显,前者菌群多样性和丰度都高于癌症患者;另外在升结肠癌患者癌区菌群中发现特异条带,经割胶、纯化、克隆后测序,明确其序列高度近于拟杆菌属。结论结肠癌患者癌区与癌旁粘膜菌群构成多样性无明显差异。正常志愿者升、横、降不同位置间粘膜菌群构成无差异,相比之下,结肠癌组粘膜菌群生物多样性和丰度有明显下降,而拟杆菌属明显增多尤其在升结肠位置。拟杆菌属可能与结肠癌的发生或发展有一定关系。
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