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目的：筛选与克隆多房棘球绦虫Em95抗原的表位，获得高效表达含不同数量表位的肽段，制备多克隆抗体，鉴定和比较其抗原性与免疫原性。 方法：提取多房棘球蚴DNA，通过克隆、构建、测序，利用DNAman软件与MEGA4软件对Em95基因特点进行分析并构建 Em95核酸序列的进化树进一步探讨其同源性。采用DNAStar软件和在线网络IEDB、SYFPEITHI和Propred等对Em95的B细胞表位和T细胞表位进行预测，寻找B细胞和T细胞共同的区域。用DNAman软件设计引物能扩增出含一个T-B联合表位的Em95-1肽段和含二个T-B联合表位的Em95-2肽段。用RNA提取试剂盒从多房棘球蚴的原头蚴中提取RNA，经反转录成cDNA，然后克隆出Em95-1与Em95-2抗原基因，并构建pMD18-T/Em95-1与pMD18-T/Em95-2质粒转入E.coliDH5a，测序鉴定序列正确。然后构建pET32a/Em95-1与pET32a/Em95-2原核表达质粒，再次测序鉴定插入序列的正确性。pET32a/Em95-1与pET32a/Em95-2重组质粒转入E.co1iBL21(DE3)进行IPTG诱导表达，用SDS-PAGE电泳分析鉴定重组蛋白的表达水平。表达的蛋白通过His-Binding-resin纯化柱进行纯化获得目的蛋白并用目的蛋白免疫动物，采用硫酸铵沉淀法纯化免疫家兔后的血清总 IgG，通过Western Blot法分析鉴定。 结果：成功克隆并构建了pET32a/Em95-1与pET32a/Em95-2原核表达质粒，经 IPTG诱导，SDS-PAGE检测表明 rEm95-1与rEm95-2重组蛋白得到成功表达，在相对分子量为28kD与27kD处有表达条带；Western Blot分析显示rEm95-1与rEm95-2重组蛋白能被多房棘球蚴病人阳性血清识别，具有良好的抗原性。免疫家兔后制备的多克隆抗体具有较高的敏感性和特异性，且含有二个表位的rEm95-2与含有一个表位的rEm95-1的肽段均具有良好的抗原性与免疫原性。 结论：运用生物信息学方法对Em95抗原的优势表位经行预测，并成功表达和鉴定含该预测表位的肽段具有良好的抗原性与免疫原性，对进一步研究Em95的抗原性和研发优势表位疫苗具有重要的意义。