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神经胶质瘤(gliomas)是颅脑最常见的肿瘤,在我国占颅脑肿瘤的35.26%-60.96%,居颅脑恶性肿瘤的第一位。脑胶质瘤具有广泛的侵袭性,由低级别向高级别进展的特性,以及高复发率、高致残率、高死亡率特点,给人类健康造成了极大危害。目前,治疗脑胶质瘤的主要手段是手术切除配合放、化疗,尽管如此,恶性脑胶质瘤患者术后中位生存期尚不足两年。紫杉醇(Paclitaxel,PTX)作为临床化学治疗肿瘤的一类生物碱类药物,已经被广泛应用于乳腺癌、卵巢癌、脑肿瘤等肿瘤的化学治疗,其独特的抗癌机制引起了许多专家学者的关注,并且有望成作为脑胶质瘤的化学治疗药物或放射增敏剂。目的:本研究旨在探讨PTX对脑胶质瘤细胞增殖抑制的相关机制,为其在神经系统恶性肿瘤中的应用提供理论基础。方法:1.筛选细胞:初步定为神经胶质瘤细胞U373,并准备相关实验试剂及材料,阅读相关实验文献并学习熟悉其中需要用到多种方法及原理。2.细胞培养:培养生长状况良好的细胞,熟悉U373细胞的生长周期,了解细胞的形状及特征。3.MTT法检测细胞活性,测定细胞的增殖抑制率,并以此将实验分组,进行以下各实验。4.流式细胞术测定不同实验组的细胞周期分布情况。5.应用免疫荧光化学方法在荧光显微镜下观察不同实验组细胞的形态学变化。6.提取各组细胞RNA,反转录cDNA并扩增细胞周期基因DNA,然后应用凝胶电泳法检测不同实验组RNA水平的变化。7.提取各组细胞蛋白,应用Western Blotting方法检测细胞周期相关蛋白的表达水平变化。8.应用统计学分析软件(SPSS11.0)给予统计学相关处理。结果:1.PTX可以明显抑制U373细胞的增殖活性,抑制作用呈时间浓度依赖性。2.细胞周期分析显示,实验组细胞G2/M期比例增高,且呈现时间依赖性。3.细胞免疫荧光显示实验组细胞被阻滞于有丝分裂期,增加了微管的稳定性,使微管解聚障碍。4. RT-PCR法显示,PTX可增加CDK1和CyclinB1相关RNA水平的表达,降低CyclinDl相关RNA水平的表达,而对CDK2相关RNA则影响不大。5. Western Blotting法显示,PTX可增加CDK1和CyclinB1相关蛋白水平的表达,降低CyclinD1相关蛋白水平的表达,而对CDK2相关蛋白则影响不大。结论:PTX能够抑制神经胶质瘤U373细胞增殖,引起有丝分裂期阻滞,诱导细胞凋亡,与其细胞周期相关蛋白表达水平密切相关。