论文部分内容阅读
目的：分别观察肾素一血管紧张素系统抑制药卡托普利和氯沙坦对血管性痴呆(VD)模型大鼠的学习记忆的改善及治疗效果,并初步探讨其可能作用机制。方法：Morris水迷宫筛选学习记忆功能正常的雄性SD大鼠60只；随机分手术组(48只)和假手术组(12只)；手术组采用不同时点分别永久性结扎大鼠左、右侧颈总动脉法建立VD模型。术后4周,筛选制模成功大鼠36只,随机分为2.5mg/Kg卡托普利组、2.0mg/Kg氯沙坦组和模型组,每组12只。用药组每天1次灌胃给药,模型组与假手术组给予等容量生理盐水,连续4周。药后4周,Morris水迷宫测试各组大鼠学习记忆能力。部分大鼠4%多聚甲醛灌注固定,石蜡包埋脑组织,连续冠状切片,HE染色和免疫组织化学染色(SABC法),TUNEL法检测海马神经元凋亡,光镜观察海马神经元的损伤、Bcl-2与Bax蛋白表达及海马神经元凋亡情况。GD-10.0多媒体彩色病理图文分析系统分析Bcl-2及Bax阳性表达的平均灰度值,灰度值越高表达产物越多。部分大鼠断头取脑,分离皮质和海马,冰上匀浆,3000r/min转速离心10min制备组织匀浆上清液。放射免疫法测定大脑皮层及海马组织中TNF-α、IL-1β含量；采用羟胺法测定大脑皮层及海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性；硫代巴比妥酸(TBA)法测定大脑皮层及海马组织中丙二醛(MDA)含量；硝酸还原酶法测定大脑皮层及海马组织中一氧化氮(NO)含量；化学比色法测定大脑皮层及海马组织中一氧化氮合酶(NOS)和海马组织中胆碱脂酶(AChE)活性。腹主动脉取血,全自动血流变快测仪测定检测血液流变学。结果：(1)手术后4周：①定位航行实验：随着训练次数的增加,各组大鼠平均逃避潜伏期均缩短。与假手术组比较,手术组大鼠逃避潜伏期均明显延长(P<0.05)。②空间搜索实验：与假手术组比较,模型组在120s内穿越平台的次数明显减少(P<0.05)。(2)药后4周：①定位航行实验：经过5天水迷宫训练,大鼠逃避潜伏期,卡托普利和氯沙坦治疗组与模型组比较明显缩短(P<0.05)；②空间搜索实验：120s内穿越平台的次数卡托普利和氯沙坦治疗组与模型组比较均有明显增多(P<0.05)。(3)病理组织学观察(HE染色)：假手术组海马组织神经元排列整齐,形态完整；细胞数量较多,细胞形态正常,体积较大,核居中,大而圆,染为淡蓝色,核仁核膜清晰,核仁染为紫色,胞质着色浅而均匀。模型组大鼠海马组织神经元排列紊乱,数目减少,胞核固缩浓染。各用药组均能改善上述神经元损伤。(4)TUNEL法检测：假手术组大鼠海马可见少数细胞胞核呈棕黄色,模型组大鼠海马许多细胞胞核着成棕黄色,不均匀,并呈环指样结构,与假手术组比较,其凋亡细胞阳性率显著增强(P<0.05)。卡托普利和氯沙坦治疗组组海马胞核着成棕黄色的细胞数明显减少,凋亡细胞阳性率亦明显降低(P<0.05)。(5)免疫组织化学检测：各组大鼠海马Bal-2、Bax阳性神经元染色均以胞浆有棕黄色物质沉积为主,也有部分胞膜及核膜着色,并可显示神经元轮廓。假手术组大鼠海马Bal-2、Bax均呈少量表达。模型组大鼠Bcl-2及Bax蛋白表达均明显增加,与假手术组比较有显著意义(P<0.05)。卡托普利组和氯沙坦组大鼠Bcl-2及Bax蛋白表达有明显改善(P<0.05)。(6)皮层及海马组织匀浆：卡托普利组和氯沙坦治疗组大脑皮质和海马SOD活性较模型组明显升高(P<0.05),两治疗组大脑皮层及海马MDA含量较模型组明显降低(P<0.05)。卡托普利组和氯沙坦治疗组大脑皮质及海马NOS活力及NO含量较模型组明显降低(P<0.05)。卡托普利和氯沙坦治疗组对大脑皮质及海马TNF-α含量和IL-1p含量较模型组明显下降(P<0.05)。与模型组比较,卡托普利和氯沙坦治疗组大鼠可降低大脑海马AChE活性(P<0.05)。(7)血液流变学：与模型空白组比较,卡托普利与氯沙坦组大鼠全血黏度的低切、中切和血浆黏度均有显著性降低(P<0.05),对血液流变学具有一定改善作用。结论：(1)不同时点分别永久性结扎大鼠左右侧颈总动脉成功制备了VD模型。(2)卡托普利及氯沙坦可改善VD模型大鼠学习记忆能力,减轻海马神经元损伤；其机制与以下因素有关：①可能通过影响Bcl-2及Bax蛋白表达,减少海马神经元凋亡；②抑制脑组织AChE活性,减少ACh的降解；③增加SOD活性增强氧自由基的清除,降低NOS活性,减少NO的含量,减轻氧自由基和NO对脑组织的损害；④减少脑组织TNF-α和IL-1β含量,减轻免疫炎症反应对神经元的损伤；⑤改善血液流变学,增加脑组织的供血供氧。