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背景糖原贮积症(Glycogen storage disease,GSD)是一组由于各种不同先天性酶缺陷所导致的糖代谢障碍,至少有12个分型。其中GSD-Ⅲ为糖原脱支酶(glycogendebranching enzyme,GDE)缺乏而引起的常染色体隐性遗传病,是GSD中发病率较高的一型(高于GSD总发病率的24%),并有a、b、c、d四个亚型。GDE编码基因为AGL(amyloglucosidase gene)。当GDE活性缺乏时,会导致大量形态结构异常的极限糊精在患者的肝脏和/或肌肉中累积,从而引发各种临床症状,如:肝脾肿大、低血糖、身材矮小、血脂异常、肌肉及肝脏受累等。部分患者可能并发肝腺瘤甚至肝细胞癌。肌肉常为进行性受累,可累及心肌,严重者可致命。根据临床症状对此疾病很难确诊,须与之鉴别的病种很多。尤其是GSD-Ⅰ的临床症状与GSD-Ⅲ极为相似,在早期很难分辨。对AGL基因进行分析可以明确诊断,但是AGL有35个外显子,全部测序以寻找突变点耗费巨大,应用于临床会造成患者严重的经济负担;常见突变点的覆盖率又小,仅筛查这些突变点会造成漏诊。目前,对肌肉和/或肝脏的活检组织进行糖原含量测定、糖原形态检测以及糖原脱支酶的活力测定是国际通用的确诊及分型依据,其耗时短、花费少,且能明确诊断。国内大陆还没有成熟的酶学测定方法,以及中国人种正常人群的参考范围。目的本研究的目的便是建立肌肉中GSD-Ⅲa的酶学诊断以及糖原含量测定方法,并且制定中国人种正常值的参考范围,以在临床上推广应用。方法1.对临床疑诊为GSD-Ⅲ的患者进行基因分析,以获得明确的GSD-Ⅲa患者组。2.制备取得知情同意的56例受试者(正常对照组35例;GSD-Ⅲa患者组12例;非GSD的其它肌病组9例)的活检肌肉组织匀浆。3.以淀粉葡萄糖苷酶降解肌肉匀浆中的糖原,通过测定葡萄糖产量以明确糖原含量。4.以磷酸化酶降解肌肉匀浆中的糖原,通过测定葡萄糖产量以明确糖原形态。5.以极限糊精为底物,测定肌肉匀浆中的糖原脱支酶活力。6.对12例GSD-Ⅲa患者的临床资料进行综合分析。7.应用所建立的方法对4例非Ⅲa型的GSD患者进行验证性实验。8.对肌纤维含脂量高的肌肉标本进行检测,观察脂肪对实验结果的影响。9.归纳总结GSD-Ⅲ的诊断参考意见。结果1.经基因分析共确诊12例GSD-Ⅲa患者,突变类型有16个。2.GSD-Ⅲa患者组的糖原含量、G1P/G(葡萄糖-1-磷酸/葡萄糖总量)比率以及脱支酶活力这三项指标与正常对照组及其他肌病组均存在显著性差异(p=0.000)。3.其它肌病组与正常对照组各项指标均无显著性差异。4.正常值范围:糖原百分含量(0.31%～0.43%,g/g),G1P/G总比率(22.37%～26.43%),脱支酶活力(0.234U～0.284U)。5.非Ⅲ型但累及肌肉的GSD患者的脱支酶活力较正常值高。6.脂肪会严重影响实验结果。结论1.肌肉中脱支酶活力检测及糖原含量、形态的测定方法对GSD-Ⅲa的诊断效率与基因分析等同。本方法更适合于临床应用,且特异性高,不会受到其他肌病的影响。2.本研究于我国首次成功建立了肌肉中GSD-Ⅲa的酶学诊断以及糖原含量测定方法,并测定出了中国人群的正常值范围,可于临床推广应用。3.应严格控制标本质量,不得掺杂脂肪组织。对肌纤维中含脂量高的肌肉要注意异常结果的出现。