氨基葡萄糖作用下Crz1在隐球菌感染小鼠毒力研究

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目的:研究氨基葡萄糖对隐球菌毒力的影响,确认氨基葡萄糖能否降低新型隐球菌感染动物的能力。分析在氨基葡萄糖参与下Crz1基因在感染动物中所起到的作用,是否起到应答氨基葡萄糖毒力调控的作用。方法:选取足够的6-8周龄,体重在15-22克小鼠,在标准动物房内喂养。实验分为A、B、C三部分:A:验证氨基葡萄糖影响新生隐球菌的毒力;B:检验Crz1是否对动物体内隐球菌的毒力起到的作用。C:检验Crz1在Glc N作用下对动物的影响。小鼠进行编号,记录接种前体重,每天观察测重,记录活动变化,接种前,隐球菌H99在YPD培养基中培养过夜。PBS洗涤后,使H99细胞悬浮浓度为2x106cells/ml,感染接种动物前,用PBS将细胞悬液稀释10x,并用细胞计数器使其浓度达到2x105cells/ml。麻醉小鼠后将含有1x10 4CFU 50μL该菌液滴入鼻腔使其吸入,建立感染隐球菌感染模型。对于Glc N喂养的小鼠,我们将在感染前一周喂养7%Glc N水,在接种后第7天麻醉处死老鼠,去除筋膜,取出肺组织,用PBS重悬后匀浆组织,依次稀释10-103倍,103梯度取出200ul均匀涂在YNB平板上,30°培养两天后克隆计数,并分析数据。结果:实验A结果显示:相比饮用清水的小鼠,给与饮用氨基葡萄糖水的实验小鼠肺部菌落计数均降低(P<0.05),而给与Glc N喂养及5%GLCN接种的小鼠,其肺部真菌菌落计数较单纯Glc N喂养组无明显统计学差异。实验B结果显示:三组小鼠WT组、Crz1超表达组及Crz1敲除组其肺部真菌菌落计数无统计学差异。三组小鼠均给与饮用氨基葡萄糖,相比WT实验组小鼠,Crz1超表达组实验小鼠肺部菌落计数降低(P<0.05),而Crz1敲除的实验小鼠肺部菌落计数增加(P<0.05),均有统计学差异。结论:实验通过小鼠吸入隐球菌建立的感染模型,通过真菌载量计数的数据分析,可以得出给予饮用氨基葡萄糖能够明显降低隐球菌感染动物的毒力/感染力;Crz1在这过程中起到调控应答氨基葡萄糖的作用,在没有氨基葡萄糖作用下Crz1对隐球菌毒力无明显影响,但在氨基葡萄糖作用下Crz1超表达菌株毒力明显降低,在Crz1敲除株感染的小鼠隐球菌感染趋于扩散。
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