【摘 要】
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为了检测EMCV是否通过内吞途径感染宿主细胞,本研究使用内吞途径抑制剂作用于BHK-21细胞后进行EMCV攻毒,通过病毒滴度、病毒拷贝数和病毒结构蛋白VP1的检测发现EMCV的感染受到抑制,提示EMCV可通过内吞途径感染BHK-21细胞。然后在EMCV感染BHK-21细胞的过程中对内吞途径标志蛋白EEA1和病毒结构蛋白VP1进行定位检测,发现二者在病毒感染细胞过程中共定位现象明显,证明EMCV可通
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为了检测EMCV是否通过内吞途径感染宿主细胞,本研究使用内吞途径抑制剂作用于BHK-21细胞后进行EMCV攻毒,通过病毒滴度、病毒拷贝数和病毒结构蛋白VP1的检测发现EMCV的感染受到抑制,提示EMCV可通过内吞途径感染BHK-21细胞。然后在EMCV感染BHK-21细胞的过程中对内吞途径标志蛋白EEA1和病毒结构蛋白VP1进行定位检测,发现二者在病毒感染细胞过程中共定位现象明显,证明EMCV可通过内吞途径感染BHK-21细胞。为了确定EMCV具体通过何种内吞途径感染宿主细胞,分别使用多种内吞途径抑制剂作用于BHK-21细胞后进行EMCV攻毒,检测EMCV对细胞的感染是否受到影响以确定EMCV通过何种内吞途径感染宿主细胞。结果提示EMCV不通过Clathrin依赖型内吞途径和巨胞饮途径感染细胞,但通过Caveolin依赖型内吞途径感染BHK-21细胞。然后又检测了两种对Caveolin依赖型内吞途径至关重要的蛋白——肌动蛋白(Actin)和发动蛋白(Dynamin)对EMCV感染BHK-21细胞的影响,结果提示肌动蛋白和发动蛋白同样影响EMCV感染BHK-21细胞。最后进行细胞接毒之后添加抑制剂的试验,检测上述内吞途径是否只在EMCV感染细胞的早期发挥作用,试验结果证明上述内吞途径只参与EMCV感染细胞的早期过程。为了探究Caveolin依赖型内吞途径的主要功能蛋白——Caveolin-1在EMCV感染宿主细胞中的作用,接下来本研究对Caveolin-1进行稳定上调和瞬时下调之后接种EMCV,病毒滴度、病毒拷贝数和病毒结构蛋白VP1的检测结果提示Caveolin-1可促进EMCV感染BHK-21细胞。在EMCV感染BHK-21细胞的过程中,对Caveolin-1和病毒蛋白VP1进行定位检测,发现二者在病毒感染细胞早期有共定位现象,证明Caveolin-1参与EMCV感染BHK-21细胞的过程。由于内吞途径与病毒感染细胞的吸附和侵入过程联系紧密,因此本研究检测了Caveolin-1在EMCV侵入和吸附过程中的作用,结果证明Caveolin-1不参与EMCV的吸附过程,但可促进EMCV侵入BHK-21细胞。上述结果证明:(1)EMCV可以通过内吞途径感染BHK-21细胞。(2)EMCV主要通过Caveolin依赖型内吞途径感染BHK-21细胞,不通过Clathrin依赖型内吞途径和巨胞饮途径感染BHK-21细胞。(3)Caveolin依赖型内吞途径相关蛋白——肌动蛋白和发动蛋白促进EMCV感染BHK-21细胞的过程。(4)Caveolin-1促进EMCV感染BHK-21细胞,且主要在侵入的过程中发挥作用。
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