半乳糖氧化酶/超氧化物歧化酶双酶催化5-羟甲基糠醛的氧化的研究

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5-羟甲基糠醛(HMF)作为一种可以生产多种化学品的原材料越来越受到人们的重视,但随着工业化的发展,在生产过程中的污染物的产生也成为了重大的难题。本文采取了一种绿色环保的方法来催化HMF,利用半乳糖氧化酶(GOase)对羟基的特异性识别来氧化HMF产生2,5-呋喃二甲醛(DFF),并在整个催化过程中无任何污染物出现。GOase是一种可以催化多种底物的铜金属酶,在与空气接触的过程中会给予O2两个电子使其形成H2O2,而H2O2会对GOase造成不可逆的失活影响。因此本次研究同时引入锰超氧化物歧化酶(MnSOD)来减小H2O2的影响,MnSOD有着类似于过氧化物酶的性质,可以通过过还原反应给予H2O2一个电子,使其形成自由基来激发GOase的中心内部活性,或是分解了H2O2,从而降低H2O2对催化过程中的负面效果。此外也围绕这两种酶进行了复合物固定,通过加入Cu2+和PO43-使其与酶共同沉淀形成GOase/MnSOD-NF复合物。该复合物呈现出球状结构,表面上有着大量的裂纹间隙,直径是30 μm左右。通过激光共聚焦和X-射线光电子能谱(XPS)等仪器分析,表明了酶蛋白可以充分且均匀地分布在复合物的结构之中。在催化HMF方面,本研究比较了游离GOase与GOase-NF的催化活性,在相同的条件下,前者的转化率为34.78%,后者为51.11%;在此基础上引入了 MnSOD形成了 GOase/MnSOD-NF复合物,并且把转化率提升至77.17%。同时也检测了加入MnSOD后对H2O2的耐受性,发现GOase-NF的活性仅保留31.9%,而GOase/MnSOD-NF得活性保留了 58.57%。
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