严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome, SARS)是一种严重危害人类健康的疾病。本研究通过对SARS冠状病毒非结构蛋白Nsp14基因进行克隆,原核表达得到了Nsp14蛋白,并为Nsp14蛋白功能的检测制备了底物。试验一、SARS冠状病毒非结构蛋白Nsp14基因的克隆。根据Genebank公布的SARS冠状病毒非结构蛋白Nsp14的基因序列设计引物,用PCR的方法把Nsp14基因从SARS冠状病毒的cDNA片段中扩增出来,将目标基因连接到原核表达载体(pET30a)中,构建重组质粒。重组质粒经PCR和酶切反应进行了初步鉴定,并将初步鉴定后的质粒进行测序。测序结果表明,克隆的Nsp14基因序列与发表基因完全一致,成功构建了原核表达载体pET30a-Exo。试验二、对非结构蛋白Nsp14进行了诱导表达和纯化。把构建的原核表达载体pET30a-Exo转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导产物经SDS-PAGE电泳后,发现目的蛋白以包涵体的形式存在。对非结构蛋白Nsp14的表达和纯化条件进行了优化。使用多步洗涤的方法对包涵体进行了初步纯化,使用稀释法对包涵体进行了重新折叠,使用镍柱纯化的方法对重折叠后的产物进一步纯化,SDS-PAGE电泳结果表明:得到了纯度较高的非结构蛋白Nsp14。试验三、对非结构蛋白Nsp14作用底物进行制备。通过转录得到了RNA,得到了非结构蛋白Nsp14作用底物。本研究结果为进一步明确非结构蛋白Nsp14的功能奠定了基础。