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植物内生真菌是一类生活在植物组织中,不会对宿主植物产生不利影响的特殊微生物种群,由于其生存环境特殊,在与宿主植物长期的复杂共生关系中,能够产生大量结构新颖的,生物活性广泛的次级代谢产物。特别是近年来许多研究者在其抗菌活性天然产物方面取得一些进展,在如今细菌耐药问题越发严峻,抗生素严重不足的情况下,我们有理由相信植物内生真菌是发现新型抗生素先导化合物的有效途径之一。本文选取了7种具有药用价值的植物为实验材料,对其植物组织中的内生真菌进行分离纯化和抗细菌活性筛选,最后得到3株活性目标菌株,并对其进行大规模发酵培养和产物提取,再进一步对其次级代谢产物的化学成分和生物活性进行了研究。主要内容如下:(1)对7种药用植物,分别为三七、金钗石斛、马鞭草、百部、粗毛淫羊藿、艾草、曼地亚红豆杉进行内生真菌分离纯化,共分离得到84株内生真菌。通过抗细菌活性筛选和HPLC化学筛选结合,最终筛选出3株抗细菌活性显著,次级代谢产物丰富的活性菌株,通过菌种鉴定分别是三七内生真菌Leptosphaeria sp.,曼地亚红豆杉内生真菌Penicillium ochrochloron和粗毛淫羊藿内生真菌Fusarium oxysporum。(2)我们将这3株活性菌株作为本文的研究对象,对其进行了扩大发酵培养,运用各种现代分离技术和光谱及波谱学技术对这些菌株的次级代谢产物进行分离纯化和结构鉴定。我们对植物内生真菌Leptosphaeria sp.进行次级代谢产物研究,发现15个化合物,经鉴定均为已知化合物,分别为6个含氮化合物(1-6),1个醌类化合物(7),3个小分子化合物(8-10),1个对苯二甲酸乙酯三聚体(11),4个二萜类化合物(12-15)。我们从内生真菌Penicillium ochrochloron的研究中发现14个化合物,其中16-18为新化合物,其余为已知化合物,包括3个α-吡喃酮类化合物(16-18),1个八氢萘类化合物(19),5个小分子化合物(20-22,28,29),5个甾体类化合物(23-27)。对内生真菌Fusarium oxysporum进行研究,发现12个化合物,均为已知化合物,包括4个小分子化合物(30,33,34,40),1个α-吡喃酮类化合物(31),2个甾体类化合物(35,36),3个酯类化合物(32,37,39),1个环肽类化合物(38),1个黄酮类化合物(41)。(3)最后,我们对分离得到的单体化合物进行了抗人类致病性细菌、抗植物病原真菌、抗肿瘤细胞毒活性和脂肪细胞糖消耗活性评价。抗细菌活性评价发现,化合物7,13-15对蜡状芽孢杆菌的MIC分别达到3.12,12.5,6.25,6.25μg/mL,化合物14对枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌具有抗菌活性(MIC=12.5μg/mL)。抗真菌活性评价发现,化合物13和15对小麦纹枯病菌的MIC可达到12.5μg/mL,化合物16,17,19对小麦赤霉病菌的抗菌活性显著(MIC=12.5μg/mL),化合物38对苹果轮纹病菌、马铃薯黄萎病菌、玉米圆斑病菌、烟草赤星病菌、番茄灰霉病菌均有较强抑制活性,MIC分别为25,25,12.5,12.5,12.5μg/mL。抗肿瘤细胞毒活性评价发现,化合物19对5株癌细胞株(A549,LN229,MGC,LOVO,MDA231)均有抑制作用,IC50分别为51.45,23.43,39.16,46.97,42.85μM。脂肪细胞糖消耗活性评价发现,化合物38对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖消耗量为8.536233(mmol/L),比正常空白对照组葡萄糖消耗量5.820297(mmol/L)有了显著提高,表明化合物38是一个有潜力的降糖活性分子。综上,本文经过筛选得到3株具有抗细菌活性的内生真菌,对其发酵产物进行研究,共得到41个单体化合物,其中有3个化合物是新的。我们评价了这些单体化合物的生物活性,发现化合物7,13-15具有显著抗菌活性,化合物19具有中等抗肿瘤活性,化合物38具有明显的增加脂肪细胞糖消耗活性。上述结果表明植物内生真菌是有潜力产生抗菌天然产物的微生物资源,同时可以看出其次级代谢产物是丰富的,生物活性是多样性的,是发现新型抗生素先导化合物的重要微生物资源。