论文部分内容阅读
目的 接触过敏（Contact Hypersensitivity，CH）是对接触致敏原发生的主要由Th细胞介导的迟发型变态反应（DTH）。Th细胞根据其产生的细胞因子不同，又可分为Th1细胞和Th2细胞。在经典接触过敏中，Th1细胞产生IL-2、IFN-γ、TNF-β等，使接触过敏发生，而Th2细胞产生IL-4、IL-5、IL-13等，抑制接触过敏反应。Th1、Th2细胞亚群可通过各自分泌的不同细胞因子相互调节，构成了Th1/Th2平衡，并调节IgE的合成。近来的研究还发现，Th1和Th2细胞可以表达不同的特异性细胞表面标志，如趋化因子受体5（Chemokine Receptor5，CCR5）和白细胞分化抗原CD30。本课题研究目的在于通过分析T细胞表面标志CCR5、CD30的表达，血清总IgE水平，以及T细胞分泌的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10的水平，来探讨Th1/Th2平衡在经典接触过敏及季节性接触过敏—一种呈季节性发病并伴血清IgE升高的特殊的接触过敏的发病机制中的作用，以期进一步探讨接触过敏的发病机理。并希望通过对接触性皮炎的研究，来探讨机体Th1/Th2平衡及其自身调节对疾病发展及转归的影响。 方法1．临床资料收集：发病期的接触性皮炎患者（包括季节性和非季节性接触性皮炎）及正常对照者。 2．患者血清总IgE测定：用三抗体免疫放射测定法（IRMA）。 南京医科大学硕士学位论文 3．外周血淋巴细胞培养：用等密度梯度离心法分离外周血淋巴细胞，用15％FCS上640培养液悬浮，使细胞浓度为ZX10wl，P皿终浓度为 100u卵l，然后加入 24孔培养板中，置5oCO。，37C 的CO。培养箱中培养48。J、时。 4．淋巴细胞表面标志的荧光抗体标f己和检测：培养前、后的淋巴细胞用荧光抗体鼠抗人 CCRSFITC、CD30IE、CD4cH ROROME作相应标记后，调细胞数为IX10‘MI，用流式细胞仪检测。 5．细胞因子收集和ELISA检测：收集培养细胞的上清，储存于刁0 C冰箱待测。检测方法按说明书提供的步骤进行，最后将反应板放入酶标仪于450urn波长处测OD值，通过标准曲线计算各细胞困子的含量，以 p咖l表示。 6．统计学处理：实验＆J：％用X‘检验和 t检验进行统计分析。 结果1．血清总屹E测定：季节组的血清总1吵水平和血清总IgE阳性率明显高于非季节组（P＜0刀5）及正常对照组（P刃．of）；非季节组和正常对照组间无显著性差异（P＞0．05） 2．CCRS 的表达：在PHA刺激培养前，季节组的＊＊4”＊＊旺”淋巴细胞低于对照组（P＜0刀1），而非季节组的CD4℃”淋巴细胞高于对照组（P＜0．05）；在 PHA刺激培养48，J、时后，季节组的 CD4勺”淋巴细胞高于对照组（P叩．01），但低于非季节组（P功．05）；季节组和非季节组的CD4”CCRS”淋＆细胞在培养后均高于培养前（均P＜0．01），＆对照组则才反（P＜0＊1）。 3，CD30的表达：在PHA刺激培养前，患者及正常对照组的外周血淋巴细胞几乎不表达CD30；在PHA刺激培养后，季节组和非季节组的CD4”CD30”双阳性细胞明显高于正常对照组（P＜o．0门，季节组和非季节组间无显著性差异（P＞ O刀5）。 4．培养细胞上清的mN－y水平：季节组的DN－Y水平低于正常对照组（＜0．05）；非季节组的IFN－y水平高于正常对照组（P＜0刀1）。 2 南京医科大学硕士学位论文 5．培养细胞上清的IL4水平：季节组的ILA水平高于正常对照组（功刀1），非季节组的1卜4水平低于正常对照组（＜0．of人 6．培养细胞上清 6b IL－10水平：季节组 69 IL－10水平较正常对照组降低（P＜0．01），而非季节组的＊刁 水平较正常对照组升高仔叩．05）。 结论 1．季节性接触性皮炎患者淋巴细胞表达 Th型细胞表面标志CCRS的能力减弱并伴血清总屹 增加，提示季节性接触性皮炎患者的淋巴细胞可能有从W1向ThZ方向分化的趋势，这可能与IgE介导的迟发相反应（LPR）有关。 2．季节性接触性皮炎和非季节性接触性皮炎患者的外周血淋巴细胞表达 ThZ型细胞表面标志 CD3 0的能力均增强，CD30与接触过敏的关系尚需进一步探讨。 3．季节性接触性皮炎患者的淋巴细胞合成 Th型细胞因子IFN－Y的能力减弱；而合成ThZ型细胞因子IL＊的能力增强，提示季节性接触性皮炎的发病可能不同于经典的由 Th细胞介导的DTH，其发病机制可能与机体在自身的免疫调节过程中，发生了由 Thl反应向m 反应的转型有关。 4．季节性接触性皮炎患者的淋巴细胞合成调节性细胞因子 ILl 的能力减弱，与非季节组相反，提示患者对炎症的自身调节能力减弱，可能是本病lgE增高以及易于复发的原因之一。也提示季节性接触性皮炎的发病机制与非季节性接触性皮炎有所不同。