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血吸虫病是由血吸虫感染引起的分布广泛、危害严重的人兽共患寄生虫病。血吸虫不同发育阶段虫体呈现独特的代谢和发育特征及显著的生物学和形态学变化,必然存在不同的基因差异表达模式,非编码小RNA在生物体的生长发育中发挥重要的调节作用,最近研究表明Argonuate家族蛋白参与此进程。本研究利用RACE技术获得2个编码日本血吸虫Argonaute蛋白的全长cDNA;利用荧光实时定量PCR分析该基因在日本血吸虫不同发育阶段的转录情况;构建原核表达质粒pET-28b-SjAGO1-PIWI和pET-32a-SjAGO1以及pET-28b-SjAGO2-PIWI,利用原核表达获取重组保守功能域蛋白和全长重组蛋白并制备相关抗体;利用免疫印迹方法和RNAi初步分析了日本血吸虫Argonaute蛋白的功能。结果表明:(1)RACE技术克隆获得了编码日本血吸虫Argonaute1蛋白(SjAGO1)的全长cDNA,包含3030 bp的完整开放阅读框,编码1009个氨基酸,预测分子量为111.7 kDa;生物信息学分析表明该基因编码的蛋白序列具有Argonaute家族蛋白的典型结构域特征,且与人和鼠等Argonaute蛋白具有较高的同源性;荧光实时定量PCR表明该基因在7,14日龄的日本血吸虫童虫中转录较高;利用重组表达的保守功能域蛋白制备了特异性较高的多克隆抗体;免疫印迹分析表明SjAGO1在雄虫中高表达。(2)RACE技术克隆获得日本血吸虫Argonaute2蛋白(SjAGO2)的全长cDNA基因,包含2808 bp的开放阅读框,编码935个氨基酸,预测分子量为106.0 kDa;生物信息学分析表明该蛋白与曼氏血吸虫AGO2相似性为83%;利用重组表达的保守功能域蛋白制备了特异性较高的多克隆抗体。免疫印迹分析该蛋白在成虫中尤其在雄虫中高表达。(3)RNA干扰SjAGO1基因后,干扰组虫体存活率仅为空白组的52.4%、39.2%、58.4%,虫体活力较低。荧光定量PCR表明干扰组日本血吸虫SjAGO1的转录量仅为空白组的2.0%、4.5%、3.2%,干扰组SjAGO1蛋白表达量明显低于空白组。结论:本论文首次获得2个编码日本血吸虫Argonaute蛋白的基因,成功将SjAGO1和SjAGO2的保守结构域在大肠杆菌中进行了表达,利用纯化蛋白免疫昆明鼠制备了相应抗体;成功筛选出对SjAGO1基因具有干扰作用的siRNA。本研究结果,为深入研究日本血吸虫Argonaute蛋白功能奠定了基础,为深入揭示血吸虫生长,特别是童虫发育及性别发育成熟机制提供了新途径,也对研制早期干预血吸虫生长和抗血吸虫生殖产卵的高效疫苗和药物有重要意义。