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目的：
研究小鼠局灶性脑缺血后基质金属蛋白酶-9(matrixmetallopreteinases-9,MMP-9)mRNA动态表达,结合神经功能障碍评分(nettoological deficit scores,NDS),观察Rho激酶(Rho associated coiledcoil forming protein kinase,ROCK)抑制剂对MMP-9和NDS的干预作用,试图探讨局灶性脑缺血后MMP-9和ROCK的作用及相互关系。
材料和方法
1.实验动物:选用12周龄健康雄性C57bl/6小鼠60只,平均体重(25.33±0.96)g。
2.小鼠局灶性脑缺血模型制备:采用右侧颅骨开窗结扎大脑中动脉皮层支主干+双侧颈总动脉夹闭10min制作小鼠Barrel皮质脑缺血模型。各组小鼠术后进行简单的神经行为评估,得分1-3分者入选本研究。TTC染色可观察脑梗死灶范围。
3.动物分组:将局灶性脑缺血小鼠随即分为ROCK抑制剂(盐酸法舒地尔)组和生理盐水组,两组按缺血后1d、2d、3d、5d和7d不同时间点又分为5个亚组,每亚组6只。
4.给药方式:盐酸法舒地尔组按照①单位剂量10mg/kg②注射总量10ml/kg③给药次数为每天一次,生理盐水组注射等量生理盐水。两组给药途径均为腹腔注射。
5.神经功能障碍评分:按上述不同时间点对各组小鼠进行NDS评分,并进行比较。
6.所有实验动物按上述不同时间点进行断头处死取材,通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR,RT-PCR)的方法检测MMP-9mRNA动态表达,并进行比较。
结果：
1.实验小鼠在Barrel皮质缺血后均表现出不同程度的左侧胡须触觉障碍,部分伴有左侧前肢运动障碍以及其他一定程度的神经功能障碍。
2.脑缺血后行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazo-liumchlorice,TTC)染色,Barrel皮质梗死区域脑组织呈苍白色,正常脑组织则呈鲜红色。
3.NDS:缺血后1d、2d和3d盐酸法舒地尔组和生理盐水组小鼠之间NDS并无明显统计学差异；缺血后5d和7d盐酸法舒地尔组和生理盐水组小鼠之间NDS有明显统计学差异(P<0.01)。
4.MMP-9mRNA的相对定量分析,生理盐水组中MMP-9mRNA在缺血后各亚组间比较并无统计学差异。盐酸法舒地尔组中MMP-9mRNA的表达按照1d、2d、3d、5d和7d的时间顺序基本呈现下降趋势,7d实验亚组与1d、3d比较有明显统计学差异(P<0.05)。将盐酸法舒地尔组和生理盐水组相同时间点两两进行比较,各相对亚组间统计学差异明显(P<0.05)。各时间点小鼠Rho激酶抑制剂应用后其MMP-9MmRNA表达量明显高于相应生理盐水对照亚组。
结论：
1.较之相应的对照亚组,Rho激酶抑制剂可使局灶性脑缺血小鼠术后5d时NDS开始明显升高,提示该药物对脑缺血后神经功能改善可能有一定帮助。
2.小鼠局灶性脑缺血后MMP-9mRNA的表达上调,在第1和第3d时出现峰值。
3.较之相应的对照亚组,Rho激酶抑制剂可使小鼠局灶性脑缺血后MMP-9mRNA的表达上调,但从1d、2d、3d、5d和7d的时间顺序上看基本呈现下降趋势。