【摘 要】
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肺癌是典型的高发病率、高致死性的恶性肿瘤,因其善于侵袭长于转移的特点造成治愈率低和预后差的治疗结果,严重危害人类健康。现如今,EMT促进肿瘤的侵袭和转移已广为人知,且越来越多的研究表明,EMT使细胞获得运动能力并浸润其周围组织使其癌变,甚至可能通过循环系统达到远端转移,造成旧病未愈新病又生的境况。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lncRNA）)是长度大于200个核苷酸,不
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肺癌是典型的高发病率、高致死性的恶性肿瘤,因其善于侵袭长于转移的特点造成治愈率低和预后差的治疗结果,严重危害人类健康。现如今,EMT促进肿瘤的侵袭和转移已广为人知,且越来越多的研究表明,EMT使细胞获得运动能力并浸润其周围组织使其癌变,甚至可能通过循环系统达到远端转移,造成旧病未愈新病又生的境况。长链非编码RNA（Long non-coding RNA,lncRNA）)是长度大于200个核苷酸,不具有编码蛋白质潜能的转录本。lncRNA通常通过影响其他基因的表达,如作为蛋白质支架、转录因子诱饵、微小RNA分子海绵等,借此参与靶基因所调控的生物学过程,如细胞增殖,细胞侵袭和迁移,细胞分化和凋亡,药物敏感性等,这些生物学过程对肿瘤的发生和发展有重要影响。本课题利用前期构建的EMT模型,根据各个时间点的变化倍数和趋势、RNA长度及RNA的序列特征筛选出TBUR-2。我们用q PCR的方法对TBUR-2在EMT细胞模型中的表达趋势进行了验证,发现TGF-β可诱导其表达量增多。结合TBUR-2的数据库信息,CPC计算出其并没有编码潜能。对A549和H1299细胞进行核质分离提取RNA并用q PCR实验来检测TBUR-2的表达含量,我们发现该lncRNA主要定位于细胞质。用RACE方法对其3’和5’末端分别进行快速扩增,我们得到TBUR-2的实际长度为1661bp,其中3’端多于数据库38bp。接下来我们构建了TBUR-2高表达的质粒,将其转染到不同的肺癌细胞中,Transwell结果显示高表达TBUR-2的肺癌细胞表现出更明显的侵袭和迁移特性,反之,用si RNA和慢病毒包装的sh RNA对肺癌细胞内源性的TBUR-2进行干扰后,肺癌细胞的侵袭和迁移的能力便会减弱。我们还对TBUR-2促进肺癌侵袭迁移能力的机制进行了初步探讨,发现TBUR-2不仅可以正向调控Vimentin在蛋白水平的表达,还与micro RNA具有相互调控关系。综上所述,TBUR-2在肺癌细胞EMT模型中表达上调,并能促进肺癌细胞侵袭和转移,该lncRNA可能是肺癌诊断与治疗的标志物和靶点。
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