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目的:考察薯蓣皂苷对Lipopolysaccharide(LPS)和α-naphthylisothiocyanate(ANIT)诱导的肝损伤及非酒精性脂肪肝的保护作用,并探讨可能的分子作用机制。方法:(1)薯蓣皂苷抗LPS诱导炎性肝损伤研究中,AML-12和Hep G-2细胞用不同浓度薯蓣皂苷与100 ng/ml LPS同时处理24 h,MTT法检测细胞活力;体内实验中,C57BL/6J雄性小鼠分为空白组、模型组、高剂量组(80 mg/kg)、中剂量组(40mg/kg)和低剂量组(20 mg/kg);Wistar雄性大鼠分为空白组、模型组、高剂量组(60mg/kg)、中剂量组(30 mg/kg)和低剂量组(15 mg/kg);连续口服给药7天,第7天灌胃给药2 h后一次性腹腔注射LPS溶液,24 h后处死实验动物,检测肝指数、ALT和AST指标,进行肝脏组织病理分析。分子机制研究中,采用免疫荧光法、Western blot、Real-time PCR、基因转染和抑制剂等方法考察薯蓣皂苷对TLR4、My D88、IRAK1、TRAF6、p-IKK、p-IκBα、p-NF-κB p65、HMGB-1蛋白,以及IL-1β、IL-6和TNF-α炎症因子表达的影响。(2)薯蓣皂苷抗ANIT诱导的肝内胆汁淤积作用研究中,大鼠肝原代细胞用不同浓度薯蓣皂苷处理,MTT法检测细胞活力、Brdu法检测细胞增殖、ROS检测氧化应激损伤、TUNEL检测凋亡情况;体内实验中,Wistar雄性大鼠分为空白组、模型组、高剂量组(60 mg/kg)、中剂量组(30 mg/kg)和低剂量组(30 mg/kg);C57BL/6J雄性小鼠分为空白组、模型组、高剂量组(80 mg/kg)、中剂量组(40 mg/kg)和低剂量组(20 mg/kg);连续口服给药7天,第7天灌胃给药2 h后一次性腹腔注射ANIT溶液,24 h后处死实验动物,检测肝指数、ALT、AST、ALP、TBIL、GSH、GSH-Px、MDA和SOD水平,TUNEL检测细胞凋亡。分子机制研究中,采用免疫荧光、Western blotting、抑制剂等方法考察薯蓣皂苷对转运体相关蛋白、凋亡相关蛋白及PI3K/Akt信号相关蛋白表达的影响。(3)薯蓣皂苷抗非酒精性脂肪肝作用研究中,大鼠肝原代细胞、AML-12和Hep G-2细胞用不同浓度薯蓣皂苷处理,MTT法检测细胞活力和细胞增殖情况,Oil red O和SudanⅢ染色检测脂质和糖原堆积,透射电镜检测细胞内脂滴;体内实验中,C57BL/6J雄性小鼠分为空白组、模型组、高剂量组(80 mg/kg)、中剂量组(40 mg/kg)和低剂量组(20 mg/kg);Wistar雄性大鼠分为空白组、模型组、高剂量组(60 mg/kg)、中剂量组(30 mg/kg)和低剂量组(15 mg/kg);连续灌胃给予薯蓣皂苷8周,并给予高脂饲料饮食;检测ALT、AST、GSH、MDA、SOD、FFA、TG、TC、血糖和OGTT等指标,H&E、Oil red O和SudanⅢ染色检测肝组织中脂质和糖原堆积。分子机制研究中,采用免疫荧光、Western blotting、抑制剂等方法考察薯蓣皂苷对SIRT1/AMPK信号通路相关蛋白表达的影响。结果:(1)在抗LPS诱导的炎性肝损伤研究中,薯蓣皂苷明显抑制LPS引起的AML-12和Hep G-2细胞增值,改善大小鼠ALT和AST指标异常及肝组织病理改变;分子机制研究显示薯蓣皂苷通过抑制TLR4/My D88信号通路相关蛋白IRAK1、TRAF6、p-IKK、p-IκBα、p-NF-κB p65和HMGB-1蛋白及炎症因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)表达,过表达TLR4和抑制My D88实验进一步证明薯蓣皂苷抑制LPS引起的急性炎性肝损伤的作用靶点是TLR4/My D88信号通路。(2)在抗ANIT诱导的肝内胆汁淤积研究中,薯蓣皂苷显著升高细胞活力,改善大小鼠肝指数,逆转ALT、AST、ALP、TBIL、GSH、GSH-Px、MDA、SOD水平,降低ROS水平,抑制细胞凋亡。分子机制研究显示薯蓣皂苷不仅显著调节Ntcp、OAT1、OCT1、Bsep和Mrp2蛋白表达水平促进胆汁酸排泄,而且能显著调控Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bak、Caspase 9和Caspase 3蛋白表达水平,此外薯蓣皂苷能明显抑制PI3K/Akt信号通路,调控Nrf2、GCLc、GCLm、HO-1和NQO1蛋白水平,起到抗胆汁酸引起的细胞凋亡和氧化应激作用,这些结果在使用PI3K抑制剂Wortmannin和Akt抑制剂Perifosine后得到了进一步证实。(3)在抗非酒精性脂肪肝研究中,薯蓣皂苷明显抑制了PA引起的肝原代细胞、AML-12细胞和Hep G-2细胞增值,降低高脂诱导的大小鼠体重,降低血清ALT、AST、TG、TC、FFA、MDA水平和空腹血糖水平,升高SOD和GSH水平;Oil red O和SudanⅢ染色及组织病理学分析表明,薯蓣皂苷显著减少脂滴产生和糖原聚集。分子机制研究表明,薯蓣皂苷显著上调SIRT1、p-AMPKα、p-AMPKα1、p-AMPKα2、CPT、Fox O1和ATGL的蛋白表达,下调SREBP-1c、ACC、FAS和SCD蛋白表达,这些结果在使用SIRT1抑制剂Nicotinamide和AMPK抑制剂Compound C后得到了进一步验证,揭示薯蓣皂苷通过调节SIRT1/AMPK信号通路来介导脂代谢。结论:本研究表明,薯蓣皂苷具有较好的抗LPS和ANIT诱导的急性肝损伤与非酒精性脂肪肝作用,这种作用可能与其介导TLR4/My D88、PI3K/Akt、SIRT1/AMPK等信号通路发挥抗炎、抗氧化、抗凋亡和脂代谢调控等作用来实现的。总之,薯蓣皂苷在保肝方面具有一定的研究和开发应用前景。