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目的: 肝癌是一种发病率和死亡率很高的肿瘤类型,每年大约有80万人因肝癌而死亡。中国是肝癌高发区,肝癌的新增病例和死亡病例位居世界第一。 为了更有效的预防和治疗肝癌,筛选和鉴定肝细胞恶性转化密切相关的生物分子有可能成为临床治疗肝癌的新靶点。本实验中我们搜索肝癌相关的基因芯片数据并将肝癌组织与正常肝组织基因表达谱进行差异分析,利用生物信息学技术筛选出具有临床意义的差异表达基因,使用一系列体外细胞实验验证筛选出的靶基因ApoF对肝癌增殖迁移的影响。 方法: 1. 从GEO数据库中下载肝癌相关的Affymetrix芯片原始数据; 2. 表达谱数据预处理; 3. 差异基因筛选; 4. 差异基因GO富集分析及功能注释; 5. 多个肿瘤数据库验证差异基因表达; 6. 本实验中构建了ApoF稳定高、低表达的肝癌细胞系MHCC97H和HUH7; 7. 利用Western blot的检测不同处理组ApoF蛋白变化情况; 8. 利用Transwell小室实验和划痕实验检测不同处理组肝癌细胞迁移功能的变化情况; 9. 利用CCK-8实验和平板克隆形成实验检测不同处理组肝癌细胞的细胞活力和克隆形成能力。 结果: 1. 对三组数据的差异基因进行交集分析之后,共找出76个差异基因,其中上调差异基因19个,下调差异基因57个; 2. 使用DAVID在线工具对差异基因进行富集分析,发现这些差异表达的基因主要富集在细胞生长、生物调节、代谢、催化活性、免疫应答、脂代谢、DNA复制等生物过程中;有8个潜在的信号转导通路与肝癌的发生发展有关; 3. 荧光定量验证差异表达基因DNASE1L3和ApoF,在肝癌中表达水平显著下调,与芯片筛选结果一致; 4. 多个数据库的联合分析表明,ApoF是一种在肝组织中特异性表达的分子,且在肝癌组织中的转录水平显著低于癌旁组织,ApoF在肝癌中可能起到了抑癌基因的作用,其表达抑制可以推动肝癌的发生和发展。 5. 成功构建ApoF蛋白高表达、低表达肝癌细胞株MHCC97H和HUH7。 6. ApoF高表达与对照组相比,ApoF的高表达抑制肝癌细胞迁移,增殖和平板克隆形成能力;ApoF低表达与对照组相比促进肝癌细胞迁移,增殖和平板克隆形成能力。 结论: 1. 肝癌与正常肝组织中存在着明显差异表达的基因,这些差异表达的基因可能在肝癌的发生发展中起着重要的作用,有可能会成为肝癌治疗的新靶点。 2. ApoF在肝癌细胞中低表达可能促进肝癌的发生发展。 3. 高表达ApoF抑制肝癌细胞的迁移、增殖能力,而低表达ApoF促进肝癌细胞的迁移、增殖能力。