论文部分内容阅读
目的:研究OSR1基因在乳腺癌中的表达水平;探讨乳腺癌中OSR1基因的启动子甲基化情况;观察OSR1基因对乳腺癌细胞恶性表型的影响;初步分析OSR1蛋白表达水平与乳腺癌各临床指标的关联。 方法:利用Oncomine数据库中所有可供在线分析的乳腺癌芯片数据集研究OSR1基因在mRNA水平的改变;利用免疫组织化学染色技术在20例乳腺癌组织及其配对的相邻正常乳腺组织上检测 OSR1基因的蛋白表达变化;利用 GEO数据库下载合适的乳腺癌甲基化芯片数据集(GSE32393),分析 OSR1基因在乳腺癌组织中的启动子甲基化情况;利用 UCSC基因组浏览平台上已注释的来自ENCODE协作组的甲基化芯片数据,分析OSR1基因在乳腺癌细胞系中的启动子甲基化情况;利用去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-Aza)处理人乳腺癌细胞MCF-7,然后采用半定量PCR技术对比处理前后OSR1基因的表达变化;利用慢病毒转染技术构建稳定过表达 OSR1基因的 MCF-7细胞,然后采用 CCK8细胞增殖试验及 Annexin V-PE/7-AAD凋亡试验分别检测细胞的增殖及凋亡改变;利用免疫组织化学染色技术检测97例乳腺癌组织中OSR1基因的蛋白表达水平,并收集相应病人的各项临床指标,采用卡方检验方法分析OSR1基因的表达水平与临床指标间的关联,初步分析其潜在的临床价值。 结果:根据芯片数据分析和免疫组织化学染色结果,OSR1基因在乳腺癌中的mRNA和蛋白的表达,均较正常乳腺组织低;针对乳腺癌细胞系及乳腺癌组织的生物信息学分析显示OSR1基因启动子甲基化是其表达下降的原因之一;经5-Aza处理后的MCF-7细胞提高了OSR1基因的表达;稳定过表达OSR1基因的MCF-7细胞增殖速度下降,凋亡增加;统计学显示乳腺癌中OSR1的蛋白表达水平与Ki-67增殖指数存在接近显著的关系(P=0.059)。 结论:OSR1基因通过启动子的甲基化在乳腺癌中表达下调;OSR1基因在 MCF-7中表现出抑癌的生物功能;OSR1的蛋白水平未见与乳腺癌各临床指标有显著性关联。