葡萄ACO基因的克隆及其遗传转化的研究

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葡萄作为一种重要的经济作物,其产量可占全球水果产量的25%,葡萄果实中含有极其丰富的营养物质,因此常常用于制成果汁、葡萄干和葡萄酒等。但同时也由于葡萄易受到病虫害、机械伤害、生理失调和果实自身成熟等因素的影响,而导致其经济效益的损失。众所周知,乙烯作为一种气体植物激素,对植物的生长发育以及植物对逆境胁迫的响应具有重要的调节作用。在乙烯的生物合成途径中,1-氨基环丙烷-1-羧酸氧化酶(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase,ACO)催化1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)转变成乙烯,它是乙烯合成途径中最后一个限速酶,对乙烯的生物合成具有重要的调控作用。因此,对ACC氧化酶的研究就显得极为必要。本研究利用RT-PCR方法从葡萄中分离到了两个ACO基因,并将其命名为VvACO1和VvACO2,其中VvACO1基因开放阅读框长1020bp,共编码339个氨基酸,VvACO2基因开放阅读框长957bp,共编码318个氨基酸。对两个ACO基因编码的氨基酸序列分析表明均具有ACO家族的保守结构域。多序列比对结果表明两个ACO基因编码的氨基酸序列与其他高等植物ACO的氨基酸序列具有较高的相似性。为了进一步分析ACO基因的功能,将ACO基因正向插入植物表达载体pCAMBIA Super-1300中,构建了ACO基因正义表达载体,以Micro-Tom番茄和Columbia型拟南芥为受体材料,利用农杆菌介导的叶盘转化法和蘸花法实现对番茄和拟南芥的遗传转化。使用PCR方法和抗生素筛选法来筛选转基因阳性苗,本研究目前获得了35株转基因Micro-Tom番茄阳性植株和转基因拟南芥的T1代种子。正义转基因番茄植株表现出植株矮小、开花早、果实成熟快等特性。
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