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目的通过检测adipophilin与Nceh1蛋白的结合情况；检测adipophilin蛋白表达水平不同的RAW264.7细胞中，加入PMA共孵育前后，细胞内Nceh1的表达及脂质蓄积的变化情况；观察adipophilin磷酸化后及脂滴出现后Nceh1的转位情况，探讨adipophilin促进细胞内脂质蓄积的机制。方法用免疫共沉淀方法检测adipophilin与Nceh1的结合情况；使用生物信息学方法分析adipophilin与Nceh1蛋白的三维结构，观察两者结合的区域；在adipophilin表达水平不同的RAW264.7细胞中分别用半定量RT-PCR和Western印迹检测Nceh1的mRNA和蛋白表达的变化，用高效液相色谱法检测细胞内胆固醇酯含量的变化。用100nmol/L的PKC的激动剂PMA预孵育稳定高表达或沉默adipophilin基因的RAW264.7细胞40min后， Western印迹方法检测细胞内磷酸化adipophilin的蛋白表达情况， Nceh1的mRNA和蛋白表达的变化用半定量RT-PCR和Western印迹检测，细胞内胆固醇酯的含量变化采用高效液相色谱检测。用50mg/L ox-LDL孵育RAW264.7细胞24h后，用激光共聚焦显微镜检测细胞内adipophilin与Nceh1的分布情况；超声裂解PMA孵育前后的RAW264.7细胞提取adipophilin和磷酸化的adipophilin蛋白，Western印迹检测磷酸化前后adipophilin在细胞内的表达分布情况；超声裂解ox-LDL孵育前后的RAW264.7细胞提取Nceh1蛋白，Western印迹检测荷脂前后Nceh1在细胞内的表达分布情况。结果免疫共沉淀结果显示adipophilin与Nceh1能够相互结合，生物信息学分析发现两者是通过蛋白的疏水区残基相互结合；adipophilin蛋白表达水平高的RAW264.7细胞中脂滴数量增加，adipophilin蛋白水平表达低的细胞中脂滴数量减少，但是Nceh1的mRNA与蛋白表达没有明显变化；在高表达adipophilin的RAW264.7细胞中加入100nmol/L PMA共孵育后，磷酸化的adipophilin表达明显增加，同时细胞中胆固醇酯的含量显著下降，但是Nceh1的mRNA与蛋白表达没有明显变化。50mg/L ox-LDL孵育RAW264.7细胞24h后，激光共聚焦显微镜检测发现adipophilin与Nceh1共同分布在脂滴表面；蛋白印迹检测发现在PMA孵育前的RAW264.7细胞中adipophilin蛋白主要分布在脂滴表面，PMA孵育后细胞中磷酸化的adipophilin蛋白主要分布在细胞质中；相反的，Western印迹检测发现在未荷脂的细胞中Nceh1主要分布在细胞质中，在荷脂的细胞中Nceh1主要分布在脂滴上。结论Adipophilin与Nceh1通过氨基酸的疏水作用相互结合；Adipophilin磷酸化前后的表达变化并不能影响Nceh1的表达，adipophilin磷酸化后其表达从脂滴上转移到细胞质中，此时细胞中胆固醇酯含量下降；细胞中脂滴出现时，Adipophilin与Nceh1共定位于脂滴表面，此时Nceh1的表达发生转移，由细胞质转移到脂滴表面；Adipophilin促脂质蓄积的机制之一是通过阻碍Nceh1对胆固醇酯的水解来实现的。