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该研究应用原位杂交的方法检测了人结肠癌组织中hTERT mRNA及hTR mRNA的表达情况,并运用hTERT mRNA、hTR mRNA基因的反义寡核苷酸脂质体转染给结肠癌细胞,观察其对结肠癌细胞端粒酶活性及凋亡的影响.第一部分:为检测人结直肠癌组织中,端粒酶组分的表达情况,采用原位杂交检测端粒酶基因hTERT mRNA、hTR mRNA在结直肠腺癌、腺瘤及距癌组织10cm以外的正常组织中的表达.第二部分:为探讨以端粒酶hTERT为靶点的反义基因治疗人结肠癌的作用,采用反义hTERT寡核苷酸脂质体转染人结肠癌细胞系SW480,用端粒酶重复序列扩增法(TRAP)-酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SW480细胞的端粒酶活性,用形态学观察和流式细胞仪检测SW480细胞凋亡.第三部分:hTR基因反义寡核苷酸抑制人结肠癌细胞SW480端粒酶活性及诱导凋亡的作用与hTERT基因反义寡核苷酸相似.结论:①大肠癌组织中hTERT mRNA、hTR mRNA的表达与正常组织比较差异有显著性,与大肠癌的Dukes分期无相关性,且hTERT mRNA表达与hTR mRNA表达呈正相关,这种显著性的正相关表明hTERT mRNA表达与hTR密切相关.该研究认为端粒酶hTR mRNA、hTERT mRNA的表达检测在结直肠腺癌诊断中可能有一定的价值,也为结直肠癌的端粒酶基因治疗提供了实验依据.②hTERT基因反义寡核苷酸能抑制SW480细胞端粒酶活性,且随着孵育时间的延长,其抑制SW480细胞端粒酶活性的作用亦增强.hTERT基因反义寡核苷酸诱导SW480细胞凋亡,且存在序列特异性和时间依赖性.作者认为hTERT基因反义治疗能够降低人结肠癌SW480细胞端粒酶活性,从而导致细胞凋亡,hTERT基因反义寡核苷酸能封闭端粒酶的催化亚基,从而抑制端粒酶的活性,也证明通过上调hTERT mRNA的表达所引起的端粒酶活化在结肠癌增殖中占重要地位,hTERT基因的反义治疗有望成为结肠癌基因治疗的新策略.③hTR基因反义寡核苷酸也能抑制SW480细胞端粒酶的活性,并能诱导SW480细胞凋亡,也具有时间依赖性,说明hTR基因反义寡核苷酸能特异封闭hTR作为端粒酶端粒延长的模板作用.也有望成为结肠癌端粒酶基因治疗的重要组成部分.