出血是急性白血病早期多见的临床表现，也是急性白血病死亡的首要原因。危及生命的出血的发生与白血病细胞所致的组织因子（TF）水平升高有关。白血病细胞除了在其细胞膜上表达大量TF抗原外，还可与内皮细胞相互作用诱导内皮细胞表达TF，导致白血病患者的凝血功能紊乱。此外，白血病患者极易合并和（或）继发细菌感染，而常见的感染致病菌中的脂多糖（LPS）成份可显著增强内皮细胞TF的活性及其表达，从而激活TF介导的凝血途径，导致弥散性血管内凝血（DIC）的发生。一氧化氮（NO）是维持血管内皮功能最重要的一种介质，由一氧化氮合酶（NOS）催化L-精氨酸生成，发挥舒张血管、抗炎、抗血栓形成等多种生物学功能。近期研究显示，体内存在内源性NOS抑制物如非对称二甲基精氨酸（ADMA），其在体内和体外均可抑制NO的合成，导致内皮功能不全。在一些心血管疾病中，血浆ADMA浓度显著升高，且与病理性血栓形成等凝血功能紊乱的发生发展密切相关。但是急性白血病患者血浆ADMA水平如何，是否与急性白血病患者凝血功能紊乱有关在国内外尚未见报道。先前研究显示内源性NO可抑制内毒素或单核细胞诱导的内皮细胞TF的表达。二甲基精氨酸—二甲胺水解酶（DDAH）是ADMA的特异性水解酶，在调节组织和细胞内ADMA水平中起关键作用。因此，DDAH／ADMA通路被认为是一个调节内源性NO生成和内皮功能的新系统。那么，DDAH／ADMA通路是否参与了白血病细胞及LPS诱导内皮细胞表达TF中的作用也是本研究要讨论的内容。全反式维甲酸（ATRA）是治疗急性早幼粒细胞白血病（APL）的首选药物，可迅速缓解白血病患者的凝血功能紊乱。新近报道ATRA可上调内皮细胞DDAH mRNA的表达，增加内源性NO的生成。去甲基雏菊叶龙胆酮（DMB）是从中草药川东獐牙菜中提取出来的一种主要的（口山）酮化合物，具有多种药理学活性。在氧化应激和炎症因素存在时，DMB可通过改善DDAH活性，降低ADMA水平发挥保护内皮细胞功能的作用。先前研究显示（口山）酮化合物在内毒素诱导的鼠DIC中有保护作用。因此，我们对DDAH／ADMA通路在ATRA及DMB分别在抑制白血病细胞或LPS诱导内皮细胞表达TF中的作用以及该作用是否与调节DDAH／ADMA通路有关进行了探讨。基于上述设想，本研究对以下二个方面进行了探讨：（1）检测ADMA水平与血浆TF在急性白血病患者中的表达，并在白血病细胞与内皮细胞细胞共培养模型中探讨：DDAH／ADMA通路对白血病细胞诱导内皮细胞表达TF的调节作用及其机制；（2）研究DDAH／ADMA通路在LPS诱导内皮细胞表达TF的作用，及其在（口山）酮抑制LPS诱导内皮细胞表达TF中的作用。方法（1）选择121例急性白血病患者，健康对照组20例。（2）培养人脐静脉内皮细胞株（HUVECs）和急性粒细胞白血病细胞株（HL-60）。建立白血病细胞与内皮细胞共培养模型。（3）构建hDDAH2 cDNA表达质粒，脂质体法转染HUVECs获得过表达DDAH2的内皮细胞。（4）高效液相色谱法（HPLC）测定血浆及细胞培养上清液中ADMA的含量；通过测定被酶代谢掉的ADMA的量评价内皮细胞DDAH的活性。（5）酶联免疫吸附双抗体夹心法（ELISA）定量检测血浆TF抗原含量。（6）MTT法观察细胞活力。（7）一期凝固法检测培养细胞冻融液的促凝活性。（8）RT-PCR法检测TF及DDAH2 mRNA水平。（9）Western Blot检测DDAH2蛋白表达。（10）荧光Ca²⁺示踪剂Fura-2检测细胞内Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i)。（11）荧光发光法检测细胞内氧自由基（ROS）生成。（12）凝胶电泳迁移率法（EMSA）分析核因子—κB（NF-κB）的DNA结合活性。结果（1）初治急性白血病患者血浆ADMA水平及TF抗原表达明显高于健康对照组（P＜0.01）；化疗后血浆ADMA水平显著降低（P＜0.01）；未缓解组和完全缓解组血浆ADMA水平明显低于初治组（P＜0.01）。复发组与初治组血浆ADMA水平无显著差异（P＜0.01）；初治急性白血病患者血浆ADMA水平与血浆TF抗原表达呈正相关（R=0.853，P＜0.01）。（2）HL-60与HUVECs共培养后，混合细胞TF促凝活性显著增高，且增加的促凝活性来自于内皮细胞而非HL-60。外源性ADMA（1μM）预处理HUVECs细胞后可显著增强共培养所致TF活性及mRNA表达上调的作用；相反，过表达DDAH2可显著抑制此过程。（3）共培养上清可显著增加细胞内Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i)，此过程可被预处理ADMA（1μM）增强，被过表达DDAH2明显抑制。细胞内Ca²⁺螯合剂BAPTA-AM可抑制共培养上清和ADMA所致内皮细胞TF活性及mRNA表达的增加。（4）ATRA(10^-7M～10^-5M)预处理内皮细胞可呈浓度依赖性地抑制共培养上清诱导内皮细胞TF活性及mRNA的表达，上调DDAH2 mRNA的表达。（5）LPS能呈浓度和时间依赖性地诱导HUVECs表达TF。外源性ADMA（1μM）后可明显增强LPS（1μg／ml）上调TF活性及mRNA表达的作用，相反L-精氨酸（50 mM）、过表达DDAH2及DMB可显著抑制此过程。（6）LPS（1μg／ml）能显著增高内皮细胞培养上清中ADMA的水平、降低内皮细胞DDAH活性，DMB（1μM～10μM）可呈浓度依赖性地抑制此过程。（7）LPS可增加细胞内ROS生成并激活NF-κB，其作用可被ADMA（1μM）增强，被L-精氨酸（50mM）、过表达DDAH2与DMB抑制。结论（1）急性白血病患者血浆ADMA水平显著升高，并与TF表达呈正相关，提示内源性ADMA含量升高可能是急性白血病患者发生凝血功能紊乱的原因之一。（2）DDAH／ADMA通路参与了白血病细胞诱导内皮细胞TF的表达，其作用与调节细胞内Ca²⁺信号有关。（3）ATRA能调节内皮细胞DDAH／ADMA通路，抑制白血病细胞诱导的内皮细胞TF的表达。（4）DDAH／ADMA通路可通过ROS-NF-κB依赖性途径调节LPS诱导内皮细胞TF的表达。（5）DMB可通过调节DDAH／ADMA系统、抑制ROS-NF-κB依赖性途径在转录水平抑制LPS诱导的TF表达。