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植物内生菌(endophyte)是一类生活于植物组织内部的微生物,包括细菌、真菌以及放线菌,其生活史的部分或全部阶段在活的植物组织内,但是并不会对植物组织造成明显病害危害。“内共生理论”已经表明,植物内生菌在与宿主植物共生的过程中,能够与宿主植物协同进化,获得植物部分功能基因,从而具有产生与宿主植物相同或相似代谢产物的能力。许多药用植物内生菌都能产生有一定活性代谢产物,近些年来,随着对植物内生菌研究的深入,已经成为寻找新药物来源的一种全新的途经。本文以古老的孑遗植物银杏(Ginkgo biloba L.)作为实验材料,采用组织块培养法分离银杏根、茎和叶不同组织的内生菌(包括真菌和细菌),利用75%酒精和3%次氯酸钠结合的方法进行样品表面消毒,以保证所分离到的微生物是银杏的内生微生物。试验结果表明,次氯酸钠对银杏根、茎和叶的消毒时间分别为5min、3min和lmin时,消毒效果最好。在此条件下,从银杏根、茎和叶共计分离到内生菌664株,其中内生真菌217株,内生细菌447株。真菌采用形态学初步进行鉴定,分属于5纲、10目、11科、13属,能鉴定到属的真菌主要有镰刀菌属(Fusarium)、棒孢属(Corynespora)、链格孢属(Alternaria)、腐皮镰孢属(Fusariumsolani)、匍柄霉属(Stemphylium)、拟茎点霉属(Phomopsis)、丛赤壳菌属(Nectria)、假尾孢菌属(Pseudocercospora)、尾孢属(Cercospora)、球座菌属(Guignardia)、毛霉属(Mucor)、腐皮壳属(Diaporthe)、腐霉属(Pythium);内生细菌利用分子生物学方法扩增其16SrDNA,鉴定分属于5纲、8目、10科、18属,鉴定到属的细菌有假单胞菌属(Pseudomonas)、金黄杆菌属(Chryseobacterium)、短波单胞菌(Brevundimonas)、叶杆菌属(Phyllobacterium)、泛菌属(Pantoea)、勒克氏菌属(Leclercia)、短小杆菌属(Curtobacterium)、克吕沃尔菌属(Kluyvera)、沙雷氏菌属(Serratia)、黄单胞菌属(Xanthomonas)、嗜冷菌属(Psychrobacter)、新鞘脂菌属Novosphingobium)、募养单胞菌(Stenotrophomonas)、黄杆菌属(Flavobacterium)、红球菌属(Rhodococcus)、短杆菌属(Brevibacterium)、棒状杆菌属(Microbacterium)和芽孢杆菌属(Bacillus)。本文采用化学显色法、薄层层析法(TLC)、高效液相色谱(HPLC)法,从根组织的内生菌中筛选到2株产黄酮类物质的真菌GF111和GF5211。紫外分光光度法测定发酵液总黄酮产量分别为14.50±1.30 mg/L和21.10土1.30 mg/L；根据菌株的形态学特征,结合真菌rDNA的居间序列(internal transcribed spacer, ITS)的系统进化分析初步鉴定GF111和GF521分别为卷枝毛霉(Mucor circinelloides)和尖镰孢菌(Fusarium oxysporum).另外,本文针对总黄酮产量较高的菌株GF521,采用单因素试验的方法对其培养基进行了优化,利用正交试验进行了培养条件的优化。优化表明,菌株GF521以麦芽糖作为碳源最佳、酵母粉作为氮源最佳、硫酸亚铁作为无机盐最佳；培养温度(A)、装液量(B)、摇床转速(C)、接种量(D)和初始pH(E)五种因素对菌株GF521的生物量和总黄酮产量都有极显著的影响(P<0.01),最终确定其最佳培养条件为A4B1C2D3E4,即培养温度为35℃,装液量为50mI/250ml,摇床转速为150rpm,初始pH为6.0,接种量为3块湿菌块。