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背景:帕金森病(Parkinson’s Disease, PD)是一种神经退行性疾病,最明显的症状是运动相关性的,包括静止性震颤、肌肉强直、运动迟缓和行走姿势困难,PD全球发病率为0.3%,给社会带来严重的经济负担。自1997年以来已先后定位了16个遗传性PD的基因位点,并克隆了11个遗传性PD致病基因,其中PINK1突变是常染色体隐性遗传早发型帕金森病的主要病因之—。BAG (BCL2-associated athanogene, BAG)家族可以与抗凋亡蛋白Bcl-2相结合,因此又称为Bcl-2相关抗凋亡蛋白家族。人类BAG家族已经报道的蛋白有6种,BAG2参与细胞内蛋白的降解过程,位于蛋白降解通路的上游,而且与泛素-蛋白酶体途径关系密切。目的:构建BAG2原核及真核表达质粒,探讨BAG2蛋白与帕金森病相关蛋白PINK1相互作用的机制。方法:1、应用聚合酶链式反应、双酶切鉴定、基因测序、western blot技术构建原核及真核表达的人类BAG2质粒。2、应用细胞免疫荧光、免疫共沉淀、体外Pull-down技术研究BAG2蛋白与帕金森病相关蛋白PINK1的细胞内共定位及相互结合关系。3、应用细胞内过表达蛋白、western blot、免疫共沉淀技术研究BAG2蛋白影响帕金森病相关蛋白PINK1的表达的研究。结果:1、pGEX-5X-1-BAG2原核质粒蛋白表达良好。2、pEGFP-N1-BAG2真核质粒蛋白表达良好。3、BAG2在细胞内与PINK1及PINK1-R492X共定位。4、BAG2在细胞内与PINK1及PINK1-R492X结合。5、BAG2在细胞外与PINK1及PINK1-R492X直接结合。6、细胞中BAG2稳定野生型PINK1的表达水平。7、细胞中BAG2稳定突变体PINK1-R492X的表达水平。8、细胞中BAG2减少野生型PINK1及突变体PINK1-R492X的泛素化水平。结论:1、成功构建原核及真核表达的人类BAG2质粒。2、BAG2蛋白与帕金森病相关蛋白PINK1直接结合。3、BAG2蛋白通过减少泛素化稳定帕金森病相关蛋白PINK1的表达。