BAG2蛋白与帕金森病相关蛋白PINK1相互作用的研究

被引量 : 0次 | 上传用户:s04325102
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
背景:帕金森病(Parkinson’s Disease, PD)是一种神经退行性疾病,最明显的症状是运动相关性的,包括静止性震颤、肌肉强直、运动迟缓和行走姿势困难,PD全球发病率为0.3%,给社会带来严重的经济负担。自1997年以来已先后定位了16个遗传性PD的基因位点,并克隆了11个遗传性PD致病基因,其中PINK1突变是常染色体隐性遗传早发型帕金森病的主要病因之—。BAG (BCL2-associated athanogene, BAG)家族可以与抗凋亡蛋白Bcl-2相结合,因此又称为Bcl-2相关抗凋亡蛋白家族。人类BAG家族已经报道的蛋白有6种,BAG2参与细胞内蛋白的降解过程,位于蛋白降解通路的上游,而且与泛素-蛋白酶体途径关系密切。目的:构建BAG2原核及真核表达质粒,探讨BAG2蛋白与帕金森病相关蛋白PINK1相互作用的机制。方法:1、应用聚合酶链式反应、双酶切鉴定、基因测序、western blot技术构建原核及真核表达的人类BAG2质粒。2、应用细胞免疫荧光、免疫共沉淀、体外Pull-down技术研究BAG2蛋白与帕金森病相关蛋白PINK1的细胞内共定位及相互结合关系。3、应用细胞内过表达蛋白、western blot、免疫共沉淀技术研究BAG2蛋白影响帕金森病相关蛋白PINK1的表达的研究。结果:1、pGEX-5X-1-BAG2原核质粒蛋白表达良好。2、pEGFP-N1-BAG2真核质粒蛋白表达良好。3、BAG2在细胞内与PINK1及PINK1-R492X共定位。4、BAG2在细胞内与PINK1及PINK1-R492X结合。5、BAG2在细胞外与PINK1及PINK1-R492X直接结合。6、细胞中BAG2稳定野生型PINK1的表达水平。7、细胞中BAG2稳定突变体PINK1-R492X的表达水平。8、细胞中BAG2减少野生型PINK1及突变体PINK1-R492X的泛素化水平。结论:1、成功构建原核及真核表达的人类BAG2质粒。2、BAG2蛋白与帕金森病相关蛋白PINK1直接结合。3、BAG2蛋白通过减少泛素化稳定帕金森病相关蛋白PINK1的表达。
其他文献
开发建设项目水土保持监理是保证"三同时"制度落实特别是保证水土保持方案实施的重要手段。我国开发建设项目水土保持监理工作存在的问题是:监理工作过多地受制于项目建设单
目的:观察通络保心贴对不稳定型心绞痛患者的症状、心电图、心肌耗氧量和心肌缺血总负荷的影响,客观评价本方法对不稳定型心绞痛的临床疗效,并进一步探讨其可能的作用机理。方
型焦制备是回收利用焦炭生产、装运和使用过程中所产生的焦粉的主要方法,煤沥青粘结剂是型焦制备最有效的粘结剂。然而,煤沥青在高温下大量挥发,使型焦内部产生大量孔隙导致
目的:研究炮制对荷叶中荷叶碱和槲皮素含量的影响。方法:以荷叶碱和槲皮素含量为指标,对荷叶生品、煅炭品及炒炭品进行比较,采用HPLC法测定荷叶碱和槲皮素含量。结果:荷叶经
精氨酸不仅参与多种营养物质的合成与代谢,而且具有增强免疫力、促进肠道发育、提高抗氧化能力等生理功能,是目前发现功能最多的氨基酸。本文就精氨酸的性质、代谢途径、生理
目的:观察搜风祛痰法对血管紧张素II致体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)LOX-1 mRNA及ET-1 mRNA表达的影响材料与方法:制备兔活心汤含药血清。采用酶消化法培养HUVECs2-3代用
随着医疗卫生事业的不断发展壮大,民营医院与公立医院一样,已经一起成为人民群众看病就医的重要选择对象。但医疗卫生市场日趋竞争激烈的形势在不断加强,各地的民营医院普遍
PA为蔷薇科植物Potentilla anserina L.的根。在民间被长期用作营养保健品与药品。本论文研究目的在于对PA抗肝炎活性的物质基础及其有效部位的制备和质量标准进行系统的研究
目的:采用横断面调查方法,了解县级社区教育事业单位人群高血压早期肾损害的流行病学现状,分析探讨高血压早期肾损害的相关危险因素,同时对高血压早期肾损害的中医证候分布及其与
如何保证城市水消费者一年365天都能正常稳定的取水,如何保证城市生活废水、工业废水合理排放和处理,事关城市可持续发展战略。城市供水机构的供水能力、供水调度措施的科学